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实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:
① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。
本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!
产品名称 | 规格 | 检测方法 | 货号 |
α酮戊二酸脱氢酶(αKGDH)测试盒微量法 | 100管/96样 | 微量法 | BK-01S6571 |
商品介绍:
测定意义: α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰。 测定原理 α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和生成琥珀酰、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。 需自备的仪器和用品 紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
试剂组成和配制:
提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
操作步骤:
1. 样品的准备:
a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。
b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。
d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。
e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。
2. 试剂盒的准备工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。
注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。
b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。
c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。
1个 0.5mLDNA超滤离心管(300-500KD)
10mL 溶液,25mg/mL Chloramphenicol Solution -20℃避光保存
2 ug pOTB7 TOMM70A pOTB7 TOMM70A 低温运输,-20℃保存
乳糖-双岐杆菌鉴定 20支
2 ug pBlueScriptR TTC21B pBlueScriptR TTC21B 低温运输,-20℃保存
弧菌检验检验培养基
10g 二肽 Glycylglycine 室温干燥保存
50T 甲型流感病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
250mL 消化液(含EDTA) Trypsin Solution -20℃保存
50T 肠道病毒通用型/EV71/柯萨奇病毒A16型3联PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
100mL DNTris HCl,1M,pH8.0
α酮戊二酸脱氢酶(αKGDH)测试盒微量法Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771) 磷酸化小板源性生因子受体-B抗体 规格: 0.1ml
GCET1 B淋巴细胞生发中心相关蛋白抗体 规格: 0.2ml
RNF111 环指蛋白111抗体 规格: 0.2ml
Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核转录因子NFKB-RelB蛋白抗体 规格: 0.1ml
MBP 髓鞘碱性蛋白(磷脂碱性蛋白)抗体 规格: 0.1ml
RHCG RH型C糖蛋白抗体 规格: 0.2ml
ABCD1/CCL22 嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗体 0.1ml
TSHR 促甲状素受体抗体 规格: 0.1ml
C1orf144 1号染色体开放阅读框144抗体 规格: 0.2ml
HEATR7B2 热休克蛋白受体家族蛋白7B2抗体 规格: 0.2ml
phospho-RPS6KB1(Thr 412) 磷酸化核糖体S6蛋白激抗体 规格: 0.1ml
ProSAPiP1 含脯突触相关蛋白相互作用蛋白1抗体 规格: 0.2ml
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