酶免疫吸附测定（ELISA）是一种广泛应用于生物医学研究、临床诊断和食品安全检测的技术。ELISA试剂盒提供了一种简便、迅速且灵敏的免疫分析方法，用于定量或定性检测特定抗原或抗体。
一、elisa试剂盒操作方法：
包被抗体的加入
1.准备包被缓冲液：根据试剂盒说明书，准备适量的包被缓冲液（如PBS）。
2.稀释包被抗体：将包被抗体按说明书要求稀释，通常为1:100到1:1000的比例。
3.加样：将稀释后的包被抗体均匀加入到每个孔中，推荐每孔添加100µL。
4.封闭：将微孔板放入4°C冰箱，过夜或在室温下孵育1-2小时，使抗体充分吸附。
洗涤步骤
1.洗涤板：用洗板机或手动方式，用洗涤缓冲液（PBS含0.05%Tween-20）洗涤微孔板3-5次，以去除未结合的抗体。
2.吸干：轻轻拍打板底，确保孔内无余液。
加入样品
1.稀释样品：根据试剂盒说明，使用适当的稀释液稀释待测样本，通常为1:10到1:100的比例。
2.加样：将稀释后的样品各100µL加入到相应孔中，并设置标准品和空白对照（只加入稀释液）。
3.孵育：将微孔板放入37°C恒温箱中孵育1-2小时，或4°C过夜，以提高检测灵敏度。
加入酶标记的二抗
1.准备二抗：根据试剂盒说明书稀释酶标记的二抗（通常为HRP标记）。
2.加样：将稀释后的二抗均匀加入每个孔中，通常为100µL。
3.孵育：再次在37°C恒温箱中孵育1小时。
再次洗涤
1.洗涤板：重复上述洗涤步骤，去除未结合的二抗。
2.吸干：轻轻拍打板底，确保孔内无余液。
加入底物
1.准备底物溶液：根据试剂盒说明书配制底物溶液（如TMB底物）。
2.加样：将底物溶液均匀加入每个孔中，通常为100µL。
3.孵育：在避光条件下，室温下孵育15-30分钟，直到出现明显的颜色变化。
终止反应
1.加入终止液：在合适的时间段后，立即向每孔中加入终止液（如2MH₂SO₄），通常为50µL。
2.混匀：轻轻摇晃微孔板，确保终止液与底物充分混合。
读数
1.测定光吸收度：使用酶标仪测定每孔的光吸收度，通常选择波长为450nm。
2.记录结果：根据标准曲线计算样品的浓度。
二、elisa试剂盒操作方法的注意事项：
1.试剂储存：所有试剂应按说明书要求储存，特别是酶标记的二抗和底物，避免光照和高温。
2.稀释过程：稀释样品和试剂时要精确，避免因稀释不当导致结果偏差。
3.洗涤步骤：洗涤过程必须干净，以减少背景信号的干扰。
4.时间控制：底物反应时间要严格控制，避免过度反应产生不准确的结果。
5.样本重复：建议每个样本至少检测三次，以提高结果的可靠性。
欢迎来到