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转氢酶2测试盒紫外分光光度法

产品厂地: 上海市
访问次数: 95
更新时间: 2022-05-24
描述:转氢酶2测试盒紫外分光光度法公司正在出售的产品:哥伦比亚培养基 英文名称:Columbia Medium 产品规格:250g 梭菌强化培养基 英文名称:Reinforced medium for clostridia 产品规格:250g FS培养基 英文名称:FS Medium 产品规格:250g LS培养基 英文名称:Lactose Sulfite Medium(LS) 产品规格:250g

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6568

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:转氢酶2测试盒紫外分光光度法

产品规格:50管/48样

检测方法:紫外分光光度法

产品货号:BK-01S6568

产品分类:氧化磷酸化系列
商品介绍:

测定意义:

TH位于线粒体的内膜上,又称为线粒体复合体六,催化NADH+NADP+NAD++NADPH相互转化,调节线粒体NAD(H)NADP(H)平衡。把逆向反应称为TH-2,催化NADPHNAD+生成NADP+NADH

测定原理:

NADHNADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+TH-2催化APAD+还原生成APADHAPADH375nm有特征光吸收,测定375nm光吸收的增加速率,来计算TH-2活性。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

QQ截图20220307153537.png 

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

50次 DNA电泳分子量标准 (300-5000) DNAMETER(2) 4℃保存

2 ug pACT-Myd pACT-Myd 低温运输,-20℃保存

抗生素检定培养基3号 Antibiotic Agar NO.3 250g

1瓶 CTLL-2细胞株 CTLL-2 低温运输和保存

GVPC琼脂平板(9cm) GVPC Agar Base 10个/包

300U 虾碱性 Shrimp Alkaline Phosphatase  -20℃保存

250mL PIPES Buffer,1.0M, pH7.5  PIPES Buffer,1.0M, pH7.5  常温保存

1mL 溶液,100mg/mL Actidione Solution -20℃保存

2 ug pPICZα FC pPICZα FC 低温运输,-20℃保存

胆汁七叶苷琼脂  2ml*20支

2 ug pBV 222 pBV 222 低温运输,-20℃保存

转氢酶2测试盒紫外分光光度法DOK5/IRS6  胞浆接蛋白Dok5抗体 规格: 0.2ml

DICER1/Dicer  核糖核酸Dicer抗体 规格: 0.1ml

eIF4E  真核翻译起始因子4E抗体 规格: 0.1ml

Nucleoprotein/NP  A型毒核蛋白抗体 规格: 0.2ml

ADAM15  去整合素样金属蛋白15抗体 规格: 0.1ml

Socs 2  细胞因子信号传导抑制蛋白2抗体 规格: 0.1ml

CPT1A  肉毒碱棕榈酰基转移1A抗体 规格: 0.1ml

APOH  载脂蛋白H抗体 规格: 0.1ml

PRDX1  过氧化还原1抗体 规格: 0.1ml

Phospho-Beta-Catenin(Ser45)  磷酸化β 连环素蛋白抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-Goat IgM/PE-Cy7  PE-Cy7标记的兔抗羊IgM 规格: 0.1ml

phospho-TERT(Ser1125)  磷酸化端粒逆转录抗体 规格: 0.1ml 

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

 


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