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辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法

产品厂地: 上海市
访问次数: 199
更新时间: 2022-05-19
描述:辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法的相关产品:6磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脱氢酶测试盒6磷酸葡糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脱氢酶测试盒微量法6磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脱氢酶测试盒6磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脱氢酶测试盒紫外分光光度法胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒微量法

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6322

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法
产品规格:50管/24样
检测方法:可见分光光度法
产品货号:BK-01S6322
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商品介绍:

测定意义
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

① 组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取


② 细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

QQ截图20220307153537.png

实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
    1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
       ③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
       ④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。

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phospho-GEF H1 (Ser886)    磷酸化Rho鸟苷酸交换因子2抗体    

phospho-Afadin (Ser1721)    磷酸化丝状肌动蛋白结合蛋白抗体    

ARPC1A    肌动蛋白相关蛋白2/3亚型1A抗体    

ANKRD32    锚蛋白重复结构域蛋白32抗体    

ATXN7L3B    共济失调7样蛋白3B抗体    

POP1    感染性蛋白白1抗体    

ASB5    含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族5抗体    

ABP1    植物生长激素ABP1抗体    

phospho-ATF2 (Thr55)    磷酸化活化复制因子2抗体    

ADRA1B    alpha 1肾上腺素能受体B抗体    

Bcl-2 alpha    Bcl2 alpha蛋白抗体    

BAT5    白细胞抗原B相关转录蛋白5抗体    

BTBD1    BTB/POZ结构域蛋白1(丙型肝炎病毒的NS5A反转录蛋白8)抗体    

BCL7B    BCL7B蛋白抗体    

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法BNC2    碱性核蛋白2(锌指蛋白basonuclin2)抗体    

BCL7C    B细胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗体    

BSCL2    先天性脂肪代谢障碍蛋白2抗体(常染色体显性遗传痉挛性截瘫17)    

BTG1    B细胞迁移基因1抗体    

BEAN1    脊髓小脑共济失调蛋白BEAN1抗体    

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

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