辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

商品介绍：

试剂组成和配制:

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

实验结果判断我有妙招：
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。
3、以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性，P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑，P／N小于1．5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照，与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求：
① 易挥发、低燃点的试剂要密封，放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气，水发生反应的物质要密封，并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂，应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放其水溶液，亚硫酸，氢硫酸溶液要密封存放，钾，钠，白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存，其相应的溶液较固体更易反应，所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封，放于阴凉通风处保存。

操作步骤：

1. 样品的准备：

a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

AHA3    AHA3抗体（拟南芥）    

Phospho-ATP1A1 (Ser23)    磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体    

phospho-ASK1 (Ser83)    磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体    

AADACL1    中性酯水解酶1抗体    

Astrocyte    人星形胶质细胞抗体    

Aldolase A    醛缩酶A抗体    

Annexin VI    膜粘连蛋白6抗体    

beta-Amyloid(25-35)    β淀粉样肽（25-35）抗体    

Angiotensin I    血管紧张素I抗体    

Adrenomedullin    肾上腺髓质素抗体(N端20肽)    

Arfaptin 2    ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体    

AVPR2    加压素受体2抗体    

ASC    凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体    

Afadin    丝状肌动蛋白结合蛋白抗体    

Antithrombin III     抗3抗体    

Serum albumin (3F4)    人血清白蛋白单克隆抗体    

CUB带状疮疹透明区样域蛋白1(CUZD1)重组蛋白    Recombinant CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1 (CUZD1)    

C-型凝集素域家族11成员A(CLEC11A)重组蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A)    

C-型凝集素域家族2成员C(CLEC2C)重组蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 2, Member C (CLEC2C)    

Dermokine蛋白(DMKN)重组蛋白    Recombinant Dermokine (DMKN)    

Dickkopf相关蛋白2(DKK2)重组蛋白    Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)    

Discs大同源物关联蛋白5(DLGAP5)重组蛋白    Recombinant Discs, Large Homolog Associated Protein 5 (DLGAP5)    

EGF样域蛋白6(EGFL6)重组蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 6 (EGFL6)    

EGF样域蛋白7(EGFL7)重组蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)    

Enah/Vasp样蛋白(EVL)重组蛋白    Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)    

FK506结合蛋白样蛋白(FKBPL)重组蛋白    Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)    

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法FMS样Flt3)重组蛋白    Recombinant FMS Like Tyrosine Kinase 3 (Flt3)    

GATA结合蛋白3(GATA3)重组蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 3 (GATA3)    

GATA结合蛋白4(GATA4)重组蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 4 (GATA4)    

G蛋白偶联受体家族C5组成员A(GPRC5A)重组蛋白    Recombinant G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A (GPRC5A)    

HtrA肽酶1(HTRA1)重组蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 1 (HTRA1)    

HtrA4(HTRA4)重组蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)