产品分类
相关文章

您的位置:首页 > 产品中心 > 生化检测试剂盒 > 辅酶Ⅰ系列 > 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法

产品中心
产品名称:

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 204
更新时间: 2022-05-19
描述:辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法公司正在出售的产品:IgG-Fc片段低亲和力受体Ⅲb(FcγR3B)重组蛋白Recombinant Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb Receptor (FcgR3B)Juxtanodin蛋白(JN)重组蛋白Recombinant Juxtanodin (JN)Kruppel样因子4(KLF4)重组蛋白Recomb

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-S01321

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称规格检测方法货号
辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样微量法BK-S01321

商品介绍:

测定意义
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
11.png

实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:
① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

AHA3    AHA3抗体(拟南芥)    

Phospho-ATP1A1 (Ser23)    磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体    

phospho-ASK1 (Ser83)    磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体    

AADACL1    中性酯水解酶1抗体    

Astrocyte    人星形胶质细胞抗体    

Aldolase A    醛缩酶A抗体    

Annexin VI    膜粘连蛋白6抗体    

beta-Amyloid(25-35)    β淀粉样肽(25-35)抗体    

Angiotensin I    血管紧张素I抗体    

Adrenomedullin    肾上腺髓质素抗体(N端20肽)    

Arfaptin 2    ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体    

AVPR2    加压素受体2抗体    

ASC    凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体    

Afadin    丝状肌动蛋白结合蛋白抗体    

Antithrombin III     抗3抗体    

Serum albumin (3F4)    人血清白蛋白单克隆抗体    

CUB带状疮疹透明区样域蛋白1(CUZD1)重组蛋白    Recombinant CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1 (CUZD1)    

C-型凝集素域家族11成员A(CLEC11A)重组蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A)    

C-型凝集素域家族2成员C(CLEC2C)重组蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 2, Member C (CLEC2C)    

Dermokine蛋白(DMKN)重组蛋白    Recombinant Dermokine (DMKN)    

Dickkopf相关蛋白2(DKK2)重组蛋白    Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)    

Discs大同源物关联蛋白5(DLGAP5)重组蛋白    Recombinant Discs, Large Homolog Associated Protein 5 (DLGAP5)    

EGF样域蛋白6(EGFL6)重组蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 6 (EGFL6)    

EGF样域蛋白7(EGFL7)重组蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)    

Enah/Vasp样蛋白(EVL)重组蛋白    Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)    

FK506结合蛋白样蛋白(FKBPL)重组蛋白    Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)    

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法FMS样Flt3)重组蛋白    Recombinant FMS Like Tyrosine Kinase 3 (Flt3)    

GATA结合蛋白3(GATA3)重组蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 3 (GATA3)    

GATA结合蛋白4(GATA4)重组蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 4 (GATA4)    

G蛋白偶联受体家族C5组成员A(GPRC5A)重组蛋白    Recombinant G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A (GPRC5A)    

HtrA肽酶1(HTRA1)重组蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 1 (HTRA1)    

HtrA4(HTRA4)重组蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)    

相关产品

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

邮箱:2843593679@qq.com

地址:上海松江区莘砖公路518号5号楼601室

版权所有 © 2022 上海帛科生物技术有限公司   备案号:沪ICP备2021006739号-1  管理登陆  技术支持:环保在线  sitemap.xml

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

13564080845

扫一扫,关注我们