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乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 106
更新时间: 2022-05-20
描述:乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法辅酶Ⅰ系列公司正在出售的产品:氯化钠琼脂培养基(颗粒) 英文名称: 产品规格:250g 缓冲蛋白胨水(BPW)颗粒 英文名称:Buffered Peptone Water 产品规格:300ml/袋*10 液体硫乙醇酸盐培养基颗粒 英文名称:Thioglycollate Medium 产品规格:300ml/袋*10 硫乙醇酸盐流体培养基颗粒 英文名称:Thioglyc

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6325

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法

100管/48样

微量法

BK-01S6325

商品介绍:

测定意义

测定意义:

LDHEC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

100次 肽还原检测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

250mL Maleate Buffer(马来酸缓冲液),0.2M,pH6.0  Maleate Buffer,0.2M,pH6.0  常温保存

25OD G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低温运输,-20℃保存

幽门螺旋杆菌固体培养基 Helicobacter Pylori Medium 250g

1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]细胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低温运输和保存

葡萄糖肉浸液肉汤 Dextrose Meat Infusion Broth 250g

100g 纤维素 DE-52 Cellulose,DE-52 室温干燥保存

50mL Zinc Acetate Solution(乙酸锌溶液),100mM  Zinc Acetate Solution,100mM  常温保存

5g 脱氧胆酸钠 Sodium Deoxycholate 常温保存

2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低温运输,-20℃保存

乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法CMT/Icmt  异戊烯半胱羧基甲基转移抗体 规格: 0.2ml

BAP31  BAP31蛋白抗体 规格: 0.1ml

glypican 1  磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗体 规格: 0.2ml

ORAV1  口腔高表达的蛋白1抗体 规格: 0.2ml

FGF16  成纤维细胞生因子16抗体 规格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC标记的鼠抗人IgG单克隆抗体 规格: 0.1ml

phospho-LCK(Tyr394)  磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪激抗体 规格: 0.1ml

Sin3b  转录抑制蛋白Sin3b抗体 规格: 0.2ml

phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)  磷酸化心脏磷蛋白抗体 规格: 0.1ml

GABR B3/GABA A Receptor beta 3  G氨基丁酸受体3抗体 规格: 0.2ml

PDK2  丙酮酸脱激亚型2抗体 规格: 0.2ml

BOb-1/POU2AF1  B细胞特异性转录因子抗体 规格: 0.1ml

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法

产品规格:100管/48样

检测方法:微量法

产品货号:BK-01S6325

产品分类:辅酶Ⅰ系列
商品介绍:

测定意义

测定意义:

LDHEC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

11.png 

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

100次 肽还原检测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

250mL Maleate Buffer(马来酸缓冲液),0.2M,pH6.0  Maleate Buffer,0.2M,pH6.0  常温保存

25OD G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低温运输,-20℃保存

幽门螺旋杆菌固体培养基 Helicobacter Pylori Medium 250g

1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]细胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低温运输和保存

葡萄糖肉浸液肉汤 Dextrose Meat Infusion Broth 250g

100g 纤维素 DE-52 Cellulose,DE-52 室温干燥保存

50mL Zinc Acetate Solution(乙酸锌溶液),100mM  Zinc Acetate Solution,100mM  常温保存

5g 脱氧胆酸钠 Sodium Deoxycholate 常温保存

2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低温运输,-20℃保存

乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法CMT/Icmt  异戊烯半胱羧基甲基转移抗体 规格: 0.2ml

BAP31  BAP31蛋白抗体 规格: 0.1ml

glypican 1  磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗体 规格: 0.2ml

ORAV1  口腔高表达的蛋白1抗体 规格: 0.2ml

FGF16  成纤维细胞生因子16抗体 规格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC标记的鼠抗人IgG单克隆抗体 规格: 0.1ml

phospho-LCK(Tyr394)  磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪激抗体 规格: 0.1ml

Sin3b  转录抑制蛋白Sin3b抗体 规格: 0.2ml

phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)  磷酸化心脏磷蛋白抗体 规格: 0.1ml

GABR B3/GABA A Receptor beta 3  G氨基丁酸受体3抗体 规格: 0.2ml

PDK2  丙酮酸脱激亚型2抗体 规格: 0.2ml

BOb-1/POU2AF1  B细胞特异性转录因子抗体 规格: 0.1ml 

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

 


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