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蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 142
更新时间: 2022-05-20
描述:蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒微量法辅酶Ⅱ系列公司正在出售的产品:李氏增菌肉汤LB2 英文名称:Listeria Enrichment Broth 产品规格:10ml*20支/包 FB2增菌液 英文名称:FB2 Enrichment Broth 产品规格:10ml*20支/包 改良盐缓冲液(PSB) 英文名称:Phosphate Buffered Saline 产品规格:10ml*20支/包 缓冲蛋白

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6367

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6367

商品介绍:

测定意义:

SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外,SP还能催化合成熊果苷,具有的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。

测定原理:

SP能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率,即可计算SP活性。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

2 ug pWHERE pWHERE 低温运输,-20℃保存

50次 真菌DNAout Fungal DNAOUT 常温

2 ug pESC-TRP pESC-TRP 低温运输,-20℃保存

李斯特氏菌检验检验培养基  

100mg 盐酸万 Vancomycin Hydrochloride -20℃保存

50T 转基因植物EPSPS基因PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

5mg 罗丹明 123 Rhodamine 123 室温干燥保存

50mL Magnesium Acetate Solution(乙酸镁溶液),1M  Magnesium Acetate Solution,1M  常温保存

50次 SP6体外转录试剂盒 SP7 in vitro Transcription Kit -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 低温运输,-20℃保存

假单胞分离肉汤 Pseudomonas Isolation Broth 250g

蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒微量法phospho-P53(Thr18)  磷酸化瘤抑制基因P53抗体 规格: 0.1ml

IGFBP4/IBP4  胰岛素样生因子结合蛋白4抗体 规格: 0.1ml

Dog IgM/Cy5  Cy5标记的兔抗犬IgM抗体 规格: 0.1ml

EGFR5/CLEC14A  表皮生因子受体5抗体 规格: 0.2ml

Cyclin B3  周期素B3抗体 规格: 0.2ml

HDAC9  组蛋白去乙酰化9抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.1mlCDC2L1  细胞分裂周期蛋白2亚型1抗体 规格: 0.2ml

CD5L/Api6  CD5L抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的兔抗抗体IgG 规格: 0.1ml

MYOM2  肌间蛋白2抗体 规格: 0.2mlMVK  甲羟戊酸激抗体 规格: 0.2ml

IL-6  白介素6抗体 规格: 0.1mlGLP-1(1G9)  GLP-1单克隆抗体 规格: 0.1ml

CABLES2  细胞周期蛋白依赖性激CABLES2抗体 规格: 0.2mlGentamicin  抗体 规格: 0.2ml

Rabbit Anti-Bov IgG/PE  PE标记的兔抗牛IgG  规格: 0.1mlPhospho-PLC gamma 1(Ser1248)  磷酸化磷酯Cγ1抗体 规格: 0.1ml

 


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