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淀粉磷酸化酶(SP)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 114
更新时间: 2022-05-24
描述:淀粉磷酸化酶(SP)测试盒微量法公司正在出售的产品:包姜氏琼脂培养基 英文名称:Bordet-Gengou Agar Medium 产品规格:250g 解磷细菌培养基(有机磷细菌培养基) 英文名称:Phosphate-solubilizing bacteria medium 产品规格:250g 固氮根瘤菌培养基 英文名称:Nitrogen-fixing Rhizobium medium 产品规格:

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6693

商品介绍:

测定意义:

淀粉磷酸化酶(Starch PhosphorylaseSP)是淀粉代谢过程的可逆反应酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。

在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于质体中,负责延长淀粉的 α-1,4-葡萄糖链的非还原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于细胞质基质中,催化淀粉中的α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸,负责葡萄糖链的磷酸解,是淀粉代谢过程中的关键酶。

在植物体中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级,一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。

测定原理:

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸,并在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP+产生NADPH,使340nm下吸光值增加。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

淀粉磷酸化酶(SP)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6693

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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

1g 苯 Phenylmethyl Sulfonyl Fluoride(PMSF) 室温保存

改良Camp-BAP氏琼脂添加剂B Modified Camp-BAP Agar additive B 1ml*5

100uL 万VanA抗性基因PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存

2 ug pMET C pMET C 低温运输,-20℃保存

原材料系列  

1瓶 SH-SY5Y细胞株 SH-SY5Y 低温运输和保存

改良Giolitti-Cantobi肉汤 Modified Giolitti-Cantoni Broth 250g

10mg 5- 氟 -5’- 脱氧尿苷 5’dFUrd (5-Fluoro-5’Deoxyuridine)        室温保存

50T 大豆内源基因PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

10次 一步式PAGE染液 One-Step PAGESTAIN 4℃保存

50T 呼吸道合胞病毒A组PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

淀粉磷酸化酶(SP)测试盒微量法Gax  生终止特异性同源盒基因抗体 规格: 0.2mlC17orf82  17号染色体开放阅读框82抗体 规格: 0.2ml

HSPA6  热休克蛋白70家族蛋白6抗体 规格: 0.2mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5  Cy5标记的驴抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗水貂IgG 规格: 0.1mlTransketolase(CT)  转酮醇(转羟乙醛)抗体(C端) 规格: 1ml

Ube2L3  泛素蛋白连接L3抗体 规格: 0.2mlCLLD7  核苷酸交换因子CLLD7抗体 规格: 0.2ml

MAGP2  纤微丝相关糖蛋白2抗体 规格: 0.1mlFrizzled 2  Wnt信号受体FZD2蛋白抗体 规格: 0.1ml

PNPT1  多核苷酸磷酸化蛋白抗体 规格: 0.2ml

IL12RB2  白细胞介素-12受体β2抗体 规格: 0.1ml

E2 tag  E2 tag标签抗体 规格: 0.1ml

CDC4/FBW7/SEL10  瘤抑制因子FBW7抗体 规格: 0.2ml

CEBP-alpha  转录调节因子C/EBP α 抗体 规格: 0.1ml

Mouse Anti-Guinea pig IgG/Cy3  Cy3标记的小鼠抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml

BEX4  脑表达X连锁蛋白4抗体 规格: 0.2ml

 


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