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产品名称:

肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 73
更新时间: 2022-05-30
描述:肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒微量法公司正在出售的产品:特级胎牛血清进口、国产Fetal bovine serum(Defined FBS) 100毫升BR新生牛血清进口、国产New born calf serum200毫升BR马血清进口、国产Horse serum200毫升BR无菌绵羊血清进口、国产Sterile Defidrinated Sheep Blood100毫升BR

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6925

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6925

商品介绍:

测定意义:

CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一,是木质素单体合成反应中的最后一步,催化多种不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

测定原理:

CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下测定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

50 mg S-Methyl-ITU . sulfate(iN0S抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

250mL Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   常温保存

10uL HRP标记的抗辛抗体 Anti DIG Ab,HRP 4℃保存

2 ug pAD-SV40T pAD-SV40T 低温运输,-20℃保存

吐温80营养琼脂 Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 250g

1瓶 M-619细胞株 M-619 低温运输和保存

10mL TE缓冲液,PH8.0  

10U 二酯Ⅱ Phosphodiesterase Ⅱ  -20℃保存

1000mL TBE Running Buffer,10X TBE Running Buffer,10X 常温保存

100次 蛋白折叠试剂盒 Protein Folding Kit 4℃保存

2 ug pSUPER pSUPER 低温运输,-20℃保存

肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒微量法CDCA1/Nuf2  细胞分裂周期相关蛋白1抗体 规格: 0.2ml

GRM2+GRM4  促代谢型谷受体2+4抗体 规格: 0.2ml

Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的羊抗人IgM 规格: 0.1ml

phospho-Tau protein(Ser202)  磷酸化微管相关蛋白抗体 规格: 0.1ml

CP110  中心体蛋白110抗体 规格: 0.2ml

factor V  凝因子5抗体 规格: 0.1ml

Calsequestrin  肌钙集蛋白/收钙素抗体 0.2ml

CD9/MRP-1  CD9蛋白抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的兔抗猴IgM 规格: 0.1ml

UAP56/BAT1  ATP-依赖的RNA解旋p47抗体 规格: 0.1ml

C17orf59  17号染色体开放阅读框59抗体 规格: 0.2ml

Phospho-RSK2(Tyr529)  磷酸化核糖体S6激RSK2抗体 规格: 0.1ml



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