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糖原磷酸化酶b(GPb)测试盒紫外分光光度法

产品厂地: 上海市
访问次数: 108
更新时间: 2022-05-31
描述:糖原磷酸化酶b(GPb)测试盒紫外分光光度法公司正在出售的产品:三苯四唑营养琼脂进口、国产TCC Nutrient Agar250克用于细菌总数测定时防止菌落蔓延三苯四唑吐温80营养琼脂进口、国产TTC Lecithin Tween 80 Nutrient Agar250克用于化妆品中细菌总数测定胰蛋白胨大豆聚酸酯琼脂进口、国产TAT Broth250克化妆品微生物检测甘进口、国产Glycine

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6985

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

糖原磷酸化酶b(GPb)测试盒紫外分光光度法

50管/24样

紫外分光光度法

BK-01S6985

商品介绍:

测定意义:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylaseGPEC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-14-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-16-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶aGPa)和无活性的糖原磷酸化酶bGPb)两种形式。GPb在一定浓度的腺苷酸(5-AMP)存在下可被激活。

测定原理:

GP催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定浓度的腺苷酸(5-AMP)时测定GPGPaGPb)活性,未添加腺苷酸(5-AMP)时测定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

1瓶 U27细胞株 U27 低温运输和保存

显色(第二代)  1000ml

100mg 遗传 G-418 Sulfate (Geneticin) 4℃保存

50T 红薯内源基因PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

30µL 植物Actin小鼠单抗 Plant Actin Mouse MAb -20℃保存

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA) Violet Red Bile Agar 250g

2mL 巯基磁珠  Magnetic beads,Sulfydryl 4℃密闭、竖直保存

2 ug pEYFP-mem pEYFP-mem 低温运输,-20℃保存

大豆酪蛋白琼脂(TSA)平板(15cm)  10个/包

1瓶 BNL CL.2细胞株 BNL CL.2 低温运输和保存

LB肉汤颗粒 LB Broth 300ml/袋*10

糖原磷酸化酶b(GPb)测试盒紫外分光光度法TNIP2/ABIN2/TNFAIP3 interacting protein 2  瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白2抗体 规格: 0.2ml

HIV gp120  艾滋毒抗体 规格: 0.1ml

FASP1/C21orf45  MaFF相关蛋白抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗牛IgG  规格: 0.1ml

ODZ3/Teneurin 3  固生蛋白3抗体 规格: 0.2mlPhospho-Paxillin (Tyr118)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体 规格: 0.1ml

PPAR-delta/beta  D型-过氧化活化增生受体抗体 规格: 0.1mlABHD1  肺α/β水解蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Phospho-Lck (Tyr505)  磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪激抗体 规格: 0.1mlResistin  抵抗素抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的兔抗牛IgM 规格: 0.1mlLRP/MVP  肺耐药相关蛋白抗体 规格: 0.1ml

C4orf42  4号染色体开放阅读框42抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/RBITC  罗丹明标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.3ml

phospho-Tau protein(Thr489)  磷酸化微管相关蛋白抗体 规格: 0.1mlSmoothened/SMO  跨膜蛋白Smoothened抗体 规格: 0.1ml

APG4B/AUTL1  自噬相关蛋白4B抗体 规格: 0.2mlTUSC3  前列抑蛋白3抗体 规格: 0.2ml

FRMD7  FRMD7蛋白抗体 规格: 0.2mlphospho-JunB(Ser259)  磷酸化活化蛋白激B抗体 规格: 0.1ml

Nox4/NADH  NADPH氧化4抗体 规格: 0.1mlNF-L/Neurofilament L/Neurofilament 68  低分子量神经丝蛋白抗体 规格: 0.2ml

 


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