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肉桂酸4羟化酶(C4H)测试盒紫外分光光度法

产品厂地: 上海市
访问次数: 119
更新时间: 2022-05-30
描述:肉桂酸4羟化酶(C4H)测试盒紫外分光光度法公司正在出售的产品:亮绿琼脂进口、国产Brilliant Green Agar250克分离培养梭菌进口、国产Clostridium Enrichment Medium250克用于梭菌增菌培养哥伦比亚琼脂进口、国产Columbia Agar Medium250克营养要求较高的细菌的及溶血试验,梭菌的检测哥伦比亚4-甲基伞形酮葡糖苷酸进口、国产Columbi

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6956

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:肉桂酸4羟化酶(C4H)测试盒紫外分光光度法

产品规格:50管/48样

检测方法:紫外分光光度法

产品货号:BK-01S6956

产品分类:其它系列
商品介绍:

测定意义:

C4H又称反式肉桂酸-4-单氧化酶,多存在于高等植物、酵母、菌类中,该酶催化肉桂酸羟化作用产生4-香豆酸盐,是苯丙烷途径中继L-苯丙解氨酶之后的第二个关键酶。

测定原理:

C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸盐和NADPH,在340nm下测定NADPH生成速率,即可反映C4H活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

QQ截图20220307153537.png 

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

吖啶黄素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*5

100mg 5- 溴 -4- 氯 -3-  -β-D- 半乳糖苷 X-gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside) -20℃保存

500支 1.5 mL RNase-free 离心管  常温

250 T 过氧化氢定量分析试剂盒(水兼容性) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

50mL Manganese Chloride Solution(溶液),1M  Manganese Chloride Solution,1M  常温保存

0.5mL NTP溶液,10 mM NTP Solution,10 mM -20℃保存

2 ug pMAL- c4x pMAL- c4x 低温运输,-20℃保存

气单胞菌添加剂  5支

1瓶 PC-12(未分化)细胞株 PC-12(未分化) 低温运输和保存

叠氮钠葡萄糖肉汤 Azide Dextrose Broth 250g

25g 十六烷基基 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室温干燥保存

肉桂酸4羟化酶(C4H)测试盒紫外分光光度法COMMD10  铜代谢结构域蛋白10抗体 规格: 0.2ml

Complement C3b alpha' chain  补体C3b-α链抗体 规格: 0.1ml

CYP17  细胞色素P450 17抗体 规格: 0.1ml

Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus)  基尔曼氏细小毒VP1/VP2抗体(大鼠潜在毒KRV)C端 1ml

Mouse Anti-Goat IgG/Bio  标记的小鼠抗羊IgG 规格: 0.1ml

Ran/ARA24  雄激素受体相关蛋白24抗体 规格: 0.2ml

CHFR  泛素连接蛋白CHFR抗体 规格: 0.2ml

Goat Anti-human IgG/AP  碱性磷酸(AP)标记的羊抗人IgG 规格: 0.1ml

FOXF1  叉蛋白F1抗体 规格: 0.2ml

CHORDC1  含半胱和组丰富域蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/AP  碱性磷酸(AP)标记的兔抗小鼠k链 规格: 0.1ml

VEGF-C  管内皮生因子C型抗体 规格: 0.1ml 

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

 


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