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猪Apelin(APLN)ELISA试剂盒实验​操作步骤

时间:2021-09-15 浏览次数:59

猪Apelin(APLN)ELISA试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。

软骨外胚层发育不良相关蛋白抗体

髓鞘蛋白P0样蛋白2抗体

雌激素受体α抗体

内质网核信号转导蛋白2抗体

锌指蛋白521抗体

大肠杆菌埃希杆菌O6抗体

植物延展素-β

内皮素-1抗体

丝裂原活化蛋白激酶4抗体

埃兹蛋白抗体

细胞转录因子ELK1抗体

内皮素-1单克隆抗体

肠道病毒71型抗体

抗志贺毒素大肠杆菌O139抗体

表皮生长因子抗体

表皮生长因子抗体

磷酸化真核翻译延长因子2抗体

真核延伸因子激酶2抗体

磷酸化真核延伸因子激酶2抗体

真核启动因子2α抗体

磷酸化一氧化氮合成酶3抗体

真核翻译延长因子2抗体

癌基因ERG3抗体

猪源产肠毒素性大肠杆菌K88-K99抗体

FAS凋亡抑制分子3抗体

纤维束1抗体

叉头蛋白P3抗体


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