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产品名称:

脱氢酶(DHA)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 149
更新时间: 2022-05-30
描述:脱氢酶(DHA)测试盒微量法公司正在出售的产品:PABA(真菌)进口、国产PABA Medium(Fungi)250克已经磺胺类及抗生素类药物治疗的患者血液等标本培养聚酯80(需氧、厌氧菌)进口、国产Tween80 Medium(Bacteria)250克油剂的无菌试验聚酯80(真菌)进口、国产Tween80 Medium(Fungi)250克油剂的真菌无菌试验真菌琼脂进口、国产Fungi Aga

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6943

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

脱氢酶(DHA)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6943

商品介绍:

测定意义:

脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶,催化底物通过细胞色素系统被氧化,释放的能量供机体使用,是生物体取得能量的一种方式。

测定原理

在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品

天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

5mL 间充质干细胞成骨细胞分化生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

100mL ACES Buffer,0.5M,pH6.0  ACES Buffer,0.5M,pH6.0  常温保存

100g DNSDS(十二烷基)  

2 ug pGAD53m pGAD53m 低温运输,-20℃保存

紫红胆盐葡萄糖琼脂(2015药典) Violet Red Bile Glucose Agar 250g

1瓶 CCC-SMC-2细胞株 CCC-SMC-2 低温运输和保存

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂(YPD)平板  9cm*10/包

5000U SP6 RNA聚合 SP6 RNA Polymerase -20℃保存

250mL Phosphate Buffered Saline (PBS),1X  Phosphate Buffered Saline (PBS),1X  常温保存

250g 干粉型LB-Lennox LB-Lennox Medium Powder 常温

2 ug pOTB7 SGTA pOTB7 SGTA 低温运输,-20℃保存

脱氢酶(DHA)测试盒微量法Rsk2/MAPKAP Kinase 1b  核糖体S6激RSK2抗体 规格: 0.2ml

RPL15  核糖体蛋白L15抗体 规格: 0.2ml

Rabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗亲和素 规格: 0.1ml

C11orf71  11号染色体开放阅读框71抗体 规格: 0.2ml

PCDH11Y  原钙粘附蛋白11Y抗体 规格: 0.2ml

PAPSS2  苷酸硫酸激2抗体 规格: 0.2ml

intestinal FABP/IFABP  肠型脂肪酸结合蛋白抗体 规格: 0.1ml

Phospho-PKR (Thr446)  磷酸化蛋白激R抗体 规格: 0.1ml

GTF2H1  通用转录因子2H肽1抗体 规格: 0.2ml

phospho-Ep300 (Ser89)  磷酸化转录接蛋白EP300抗体 规格: 0.1ml

VGLL3  转录辅助因子退变样蛋白3抗体 规格: 0.2ml

C2orf44  2号染色体开放阅读框44抗体 规格: 0.2ml

 


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