NAD苹果酸酶（NADME）测试盒微量法

实验结果判断我有妙招：

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。

3、以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性，P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑，P／N小于1．5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照，与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求：

① 易挥发、低燃点的试剂要密封，放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气，水发生反应的物质要密封，并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂，应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放其水溶液，亚硫酸，氢硫酸溶液要密封存放，钾，钠，白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存，其相应的溶液较固体更易反应，所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封，放于阴凉通风处保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

商品介绍：

试剂组成和配制:

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

操作步骤：

1. 样品的准备：

a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

1nmol EcoR I-Not I-BamH I接头 EcoR I-Not I-BamH I Adaptors -20℃保存

2 ug pMXS-GL (2000 ng) pMXS-GL (2000 ng) 低温运输，-20℃保存

white培养基 White Medium 250g

500mL Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide   Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide   常温保存

醋酸铅培养基 Lead Acetate Medium 250g

5g 固绿 Fast Green FCF 室温干燥保存

50T 副鸡嗜血杆菌PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

100mg 5-溴-4-氯-3-  BCIP -20℃保存

2 ug pBlueScriptR PEX5L pBlueScriptR PEX5L 低温运输，-20℃保存

1.5mL 非RNA清除剂2.0 RNA Erasol 2.0 4℃保存

2 ug pET-9d pET-9d 低温运输，-20℃保存

NAD苹果酸酶（NADME）测试盒微量法phospho-SHC(Tyr349)  磷酸化SH2结构域转化蛋白1抗体 规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/APC  APC标记的羊抗大鼠IgG 规格: 0.1ml

DSU/MREG  MREG蛋白抗体 规格: 0.2ml

RIP1  受体相互作用蛋白激1抗体 规格: 0.2ml

Integrin alpha E/CD103  整合素αE抗体 规格: 0.1ml

E.coli DH-5 Alpha  DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体 规格: 0.1ml

TCTP  翻译控制瘤蛋白抗体 规格: 0.1ml

Sortilin/NTR3/Gp95  神经降压素受体3抗体（糖蛋白95） 规格: 0.2ml

KLHL7  kelch样蛋白7抗体 规格: 0.2ml

CCDC68/se57-1  卷曲螺旋结构域蛋白68抗体(皮肤T淋巴细胞相关抗原) 规格: 0.2ml

Prkg1/cGKI  cGMP依赖性蛋白激1抗体 规格: 0.1ml

ESYT2/FAM62B  延伸突触蛋白2抗体 规格: 0.2ml