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胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 97
更新时间: 2022-05-20
描述:胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒微量法辅酶Ⅱ系列公司正在出售的产品:含90ml盐缓冲液均质袋 英文名称:Phosphate Buffered Saline 产品规格:10个/包 含225ml 缓冲蛋白胨水(BPW)均质袋 英文名称:Buffered Peptone Water 产品规格:10个/包 含900ml缓冲蛋白胨水(BPW)均质袋 英文名称:Buffered Peptone Wate

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6355

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6355

商品介绍:

测定意义:

ICDHcEC 1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸,同时还原NADP+生成NADPHICDHc是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。

测定原理:

利用ICDHc催化NADP+还原成NADPH反应,在340 nm下测定NADPH浓度的增加。

所需的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
QQ截图20220307153537.png

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

氯化钠素B肉汤基础(SCPB) Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 250g

100g 盐酸胍 Guanidine Hydrochloride   4℃密封干燥保存

1%TTC溶液  1ml/支*5

1mL 秋水仙素溶液 Colchicine Solution 常温保存

2 ug pBlueScript SK(-) pBlueScript SK(-) 低温运输,-20℃保存

100g DNCTAB(十六烷基基)  

2 ug pGEX-20T pGEX-20T 低温运输,-20℃保存

1%聚酯80-玉米琼脂培养基 1%Tween 80-Corn Agar Medium 250g

1瓶 CCC-HEK-1细胞株 CCC-HEK-1 低温运输和保存

肠球菌显色培养基  1000ml

1mL EDTA溶液,0.2M EDTA Solution -20℃保存

胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒微量法ADCY9  苷酸环化9抗体 0.2mlCAMK1D  钙调蛋白激CaMK1D抗体 规格: 0.2ml

CTGF  结缔组织生因子抗体 规格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP  辣根过氧化物标记的羊抗小鼠IgG 规格: 0.1ml

PLAGL1/ZAC1  多型性瘤基因样蛋白1抗体 规格: 0.2mlC17orf42  17号染色体开放阅读框42抗体 规格: 0.2ml

UXT/Ubiquitously expressed transcript  广泛表达转录蛋白UXT抗体 规格: 0.2mlBEND5  BEN结构域蛋白5抗体 规格: 0.2ml

FGF20  成纤维细胞生因子20抗体 规格: 0.2mlChloroplast protease  叶绿体蛋白抗体(植物) 规格: 1ml

CCDC11  卷曲螺旋结构域蛋白11抗体 规格: 0.2mlLAMR1  层粘连蛋白受体1抗体(N端) 规格: 0.1ml

GPR39  G蛋白偶联受体39抗体 规格: 0.1mlGFRA4  GDNF家族受体α-4抗体 规格: 0.2ml

phospho-APBB1 (Ser347)  磷酸化铁蛋白Fe65抗体 规格: 0.1mlphospho-IGF1R(Tyr1280)  磷酸化胰岛素样生因子1受体抗体 规格: 0.1ml

BFAR/RNF47  环指蛋白47抗体 规格: 0.2mlPhospho-Ack1(Tyr284)  磷酸化Ack1抗体 0.1ml

MLF1/2/3  髓细胞性白蛋白1抗体 规格: 0.2ml

phospho-Rab24(Ser95)  磷酸化ras基因相关蛋白Rab24抗体 规格: 0.1ml

TBX1/Brachyury  先心相关蛋白TBX1抗体 规格: 0.2ml

 


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