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特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒可见分光光度法
产品规格:50管/24样
检测方法:可见分光光度法
产品货号:BK-01S6350
产品分类:辅酶Ⅱ系列
商品介绍:
测定意义: 辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。 测定原理 分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。 所需的仪器和用品 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
2 ug pCAMBIA2330 pCAMBIA2330 低温运输,-20℃保存
纤维二糖-(CC)琼脂 Cellobiose-polymyxin E Agar 250g
10g Indole 室温保存
50T 链球菌B族PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
5mL 黑色素细胞生长因子-不含TPA Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
250mL Beta-ME-EDTA Solution(beta-EDTA溶液) Beta-ME-EDTA Solution 常温保存
1.5mL miRNA尿素-PAGE上样液,6× miRNAoN -20℃保存
2 ug pGCsi/H1/Neo SHGFP pGCsi/H1/Neo SHGFP 低温运输,-20℃保存
抗生素检定培养基8号 Antibiotic Agar NO.8 250g
1瓶 Cyc-Tag(S49)细胞株 Cyc-Tag(S49) 低温运输和保存
CIN-1琼脂平板(9cm) CIN-1 Agar 10个/包
辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒可见分光光度法CDKL3/NKIAMRE 细胞周期蛋白依赖性激样3抗体 规格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的驴抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG 兔抗猪IgG 规格: 1mg
Bestrophin 4 卵黄状黄斑蛋白4抗体 规格: 0.2ml
BRCC4/BRCC45 易基因复合蛋白4抗体 规格: 0.2ml
Goat anti-Rabbit IgG whole serum 羊抗兔IgG抗清 规格: 1ml
phospho-ITGB4(Tyr1494) 磷酸化整合素β4抗体 规格: 0.1ml
LARG Rho的核苷酸交换因子12抗体 规格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗羊IgG 规格: 0.1ml
phospho-Tau protein(Ser214) 磷酸化微管相关蛋白抗体 规格: 0.1ml
LDHC/Cancer,testis antigen 32 酸脱LDH-C(瘤/睾抗原32)抗体 规格: 0.1ml
MAGEA11 黑色素瘤相关抗原11抗体 规格: 0.2ml
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
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