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辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 99
更新时间: 2022-05-30
描述:辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒微量法辅酶Ⅱ系列公司正在出售的产品:庆大琼脂平板(9cm) 英文名称:Gentamycin Agar 产品规格:10个/包 BCYE琼脂平板(9cm) 英文名称:BCYE Agar Base 产品规格:10个/包 GVPC琼脂平板(9cm) 英文名称:GVPC Agar Base 产品规格:10个/包 我妻氏(9cm) 英文名称:Wagstsuma Bloo

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6349

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒微量法

100管/48样

微量法

BK-01S6349

商品介绍:

测定意义:

辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+NADPH含量测定可以计算NADPNADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+NADPHNADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+NADPH,从而检测NADP+含量。

所需的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

改良EC肉汤(mEC+n)颗粒 Modified EC Broth 225ml/袋*10

100µL 即用型GFP标签蛋白裂解液 GFP-Tagged Protein Lysate -20℃保存

2 ug pTCK303 pTCK303 低温运输,-20℃保存

4次 大提柱式动物DNAout Maxi Column Animal DNAOUT 常温

2 ug pDR195 pDR195 低温运输,-20℃保存

50%卵黄乳液 50% egg Yolk emulsion 5ml*10

100mL 琼脂糖凝胶 4B Sepharose 4B 4-8℃保存

50T 蟹特定基因序列PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

200 mL 大鼠 NK 细胞分离液1.068 Cell Separation Solution -20℃保存

100mL Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.0   Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.0   常温保存

七叶苷生化管  20支

辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒微量法CD144/VECD/VE Cadherin  上皮型钙粘附分子抗体 规格: 0.1ml

Mafa  v-maf 肌腱膜纤维肉瘤基因同源物A抗体 规格: 0.1ml

DCTN6  动力蛋白激活蛋白6抗体 规格: 0.2ml

IFNA16/Interferon alpha 16  干扰素α16抗体 规格: 0.2ml

PAPP A2  娠相关浆蛋白A2抗体 规格: 0.2ml

Phospho-TrkA (Ser791)  磷酸化酪激A抗体 规格: 0.1ml

Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163)  磷酸化髓样细胞白-1抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-CY5  PE-CY5标记的兔抗牛IgM 规格: 0.1ml

BRCA2  易基因2抗体 规格: 0.1ml

CXX1/Cerebral protein 5  脑蛋白5抗体 规格: 0.2ml

CLK3  细胞分裂周期样激3抗体 规格: 0.2ml

CD24  CD24抗体 规格: 0.1ml



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