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超氧阴离子测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 304
更新时间: 2022-05-24
描述:本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!
产品名称规格检测方法货号
超氧阴离子测试盒微量法100管/96样微量法BK-01S6431
商品介绍:
测定意义:
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
测定原理:
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6431

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

超氧阴离子测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6431

商品介绍:

测定意义:

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。

测定原理:

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据A530值可以计算样品中O2-含量。

自备实验用品及仪器:

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。11.png

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

50次 双染细胞凋亡检测试剂盒 Double-Stain Apoptosis Detection Kit 4℃避光保存

250mL IEF Cathode Buffer,10X IEF Cathode Buffer,10X 常温保存

100次 即用型荧光定量PCR试剂盒 Instant Fluorescent qPCR Kit -20℃保存

2 ug pLV-cGFPII pLV-cGFPII 低温运输,-20℃保存

脆弱拟杆菌活化培养基肉汤 Bacteroides Phage Recovery Medium Broth 250g

1瓶 NCI-H295R细胞株 NCI-H295R 低温运输和保存

m-远藤氏培养基 M-Endo Medium 250g

1mg 亲和素 Avidin, Chicken Egg White -20℃保存

500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8   Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8   常温保存

1mg 重组蛋白G Recombinant Protein G -20℃保存

2 ug pBAD/gIII C pBAD/gIII C 低温运输,-20℃保存

超氧阴离子测试盒微量法GLO1  乙二醛1抗体 规格: 0.1mlTIMP-1(CT)  金属蛋白组织抑制因子-1抗体(C端) 0.1ml

ChRM3/Acetylcholine receptor(M3)  毒蕈碱型乙酰受体M3抗体 规格: 0.1mlCCL15/MIP5  巨噬细胞性蛋白15 规格: 0.1ml

PNAT/NAT2  N-乙酰基转移2抗体 规格: 0.1mlDHRSX  短链脱/还原家族X抗体 规格: 0.2ml

HMGA1/HMG-I/HMG-Y  高迁移率族蛋白A1抗体 规格: 0.2mlKLLN   Killin-p53调节复制抑制蛋白抗体 规格: 0.2ml

PTGER1  前列素EP1受体抗体 规格: 0.1mlNoggin  指(趾)关节粘连NOG蛋白抗体 0.2ml

phospho-PI3K p85/PIK3R1(Tyr368)  磷酸化磷脂酰肌醇激抗体 规格: 0.1mlIGSF16/CD300C  免疫球蛋白超家族成员16抗体 规格: 0.2ml

PRKD1/PKC mu  蛋白激C mu型抗体 规格: 0.2mlphospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141)  磷酸化p21激活激1/2/3抗体 规格: 0.1ml

NS5ATP9/KIAA0101  丙型毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9抗体 规格: 0.2mlIFNAR2/IFNABR  干扰素α受体2抗体 规格: 0.2ml

CD4  CD4抗体 0.1mlFOXO1  叉蛋白O1抗体 规格: 0.1ml

CLEC2D/OCIL  CLEC2D蛋白抗体 规格: 0.2ml

HSPB7/cvHSP  热休克蛋白β7抗体 规格: 0.2ml

SLC16A7/MCT2  单羧酸转运蛋白2抗体 规格: 0.1ml

 


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