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超氧阴离子清除能力测试盒可见分光光度法

产品厂地: 上海市
访问次数: 103
更新时间: 2022-05-24
描述:超氧阴离子清除能力测试盒可见分光光度法公司正在出售的产品:葡萄糖铵培养基 英文名称:Ammonium Dextrose Medium 产品规格:250g 葡萄糖半固体培养基 英文名称:Dextrose Semisolid Medium 产品规格:250g 动力--尿素培养基基础(MIU) 英文名称:Motility Indol Urea Medium Base 产品规格:250g SIM培养基 英

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6461

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

超氧阴离子清除能力测试盒可见分光光度法

50管/48样

可见分光光度法

BK-01S6461

商品介绍:

测定意义:

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基,可攻击生物大分子,如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等,使其交链或者断裂,引起细胞结构和功能的破坏,与机体衰老和病变有很密切的关系,清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

测定原理:

AP-TEMED系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-与对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、1 mL玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

50T 弹状病毒PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

30次 银染清除剂 Silver Stain Erasol 常温保存

2 ug SD1211-chip-Ctr SD1211-chip-Ctr 低温运输,-20℃保存

1次 96孔板质粒DNAout(真空法)  

2 ug pET-41b(+) pET-41b(+) 低温运输,-20℃保存

葡萄糖发酵管(军团菌)  20支

2 ug pED-DsbA-pp-air pED-DsbA-pp-air 低温运输,-20℃保存

20个 杂交袋 Hybridization Bag 常温

10次 一管式点突变试剂盒 One-Tube Mutagenesis Kit -20℃保存

100mL MOPS Buffer,0.5M,pH6.5   MOPS Buffer,0.5M,pH6.5   常温保存

100次 古细菌+真细菌种属鉴定 PCR Mix 3(rDNA) Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

超氧阴离子清除能力测试盒可见分光光度法BRMS-1  转移抑制基因1抗体 规格: 0.1ml

VMAT2  脑单胺类神经递质转运蛋白抗体 规格: 0.2ml

Syntrophins/SNTA1/Syntrophin Alpha1  神经肌肉接蛋白SNTA1抗体 规格: 0.2ml

Phospho-SMC1(Ser957)  磷酸化染色体结构维持蛋白质1抗体 规格: 0.1ml

HEY2  转录因子HEY2蛋白抗体 规格: 0.2ml

CCDC40  卷曲螺旋结构域蛋白40抗体 规格: 0.2ml

NIPP1/ARD1  核抑制蛋酸1抗体 规格: 0.2ml

RNF122  环指蛋白122抗体 规格: 0.2ml

CKLFSF2 isoform 1  趋化素样因子超家族成员2亚型1抗体 0.2ml

TRIP  瘤坏死因子受体相互作用蛋白抗体 规格: 0.1ml

C4orf22  4号染色体开放阅读框22抗体 规格: 0.2ml

p53 (FL-393)  瘤抑制基因p53抗体 规格: 0.2ml

 


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