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碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒微量法

简要描述:碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒微量法公司正在出售的产品:红葡萄糖肉汤 英文名称:Phenol Red Dextrose Broth 产品规格:250g 硝酸盐肉汤 英文名称:Nitrate Broth 产品规格:250g 动力-硝酸盐培养基(A法) 英文名称:Power - nitrate medium 产品规格:250g 木糖-明胶培养基 英文名称:Xylose - gelatin medi

  • 产品型号:
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2023-12-27
  • 访  问  量:450

详细介绍

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒微量法

产品规格:100管/48样

检测方法:微量法

产品货号:BK-01S6544

产品分类:酯酶系列
商品介绍:

测定意义:

AKP/ALP是一种含锌的糖,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

测定原理:

在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基和铁反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。

自备仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

QQ截图20220307153537.png 

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

500mL TBS-Tween-20 (TTBS),10X TBS-Tween-20 (TTBS),10X 常温保存

10mL 钴柱介质 Co-Agarose Resin 4℃保存

2 ug pSUPER-retro-GFP/Neo pSUPER-retro-GFP/Neo 低温运输,-20℃保存

1mL RNase-free 水 RNase-free Water 常温

2 ug pCold II pCold II 低温运输,-20℃保存

SCHAEDLER琼脂 SCHAEDLER AGAR 250g

1g Pyridoxamine HCl -20℃避光保存

50T 嗜肺军团菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)  低温运输,-20℃保存

10 μg  Okadaic acid钾盐(PP1和PP2A抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

250mL Formalin-Sodium Acetate Solution Formalin-Sodium Acetate Solution 常温保存

5次 天净沙非同位素探针杂交试剂盒(适用常规DNA/RNA探针) Nonradioactive Probe Hybridization Kit 杂交液-20℃保存,其余成分常温

碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒微量法GPAM  线粒体甘油3磷酸酰基转移抗体 规格: 0.2ml

UBF1  核仁转录因子1抗体 规格: 0.1ml

CEP128  中心体蛋白128抗体 规格: 0.2ml

CHRNB2  碱型乙酰受体B2抗体 规格: 0.2ml

CKLFH3/CMTM3  趋化素样因子超家族成员3抗体 规格: 0.2ml

ApoER2  载脂蛋白E2受体抗体 规格: 0.1ml

Glypican 5  磷脂酰基醇蛋白聚糖-5抗体 规格: 0.2ml

HSP1/Protamine P1  子鱼蛋白P1抗体 规格: 0.2ml

Phospho-EGFR(Tyr845)  磷酸化表皮生因子受体抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/PE  PE标记的兔抗猴IgG 规格: 0.1ml

CD33L/OBBP1  CD33L抗体 规格: 0.2ml

p70 S6 Kinase Beta 2/P70 Beta 2  核糖体S6蛋白激β2抗体 规格: 0.2ml 

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

 


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