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线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 141
更新时间: 2022-05-24
描述:线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测试盒微量法公司正在出售的产品:酸化MRS琼脂(AMRSA) 英文名称:Acidification MRS Agar 产品规格:250g GYP白亚琼脂培养基 英文名称:GYP Medium 产品规格:250g BCP寒天培地(含琼脂) 英文名称:BCP Medium 产品规格:250g LAMVAB琼脂 英文名称:LAMVAB Agar 产品规格:250g

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6585

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6585

商品介绍:

测定意义:

MDH EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDHTCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDHNADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。

测定原理:

MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

1瓶 PC-3细胞株 PC-3 低温运输和保存

CATC琼脂 CATC Agar 250g

5g  Chloramphenicol 室温保存

50T 阿留申病毒PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

1g 乙酰丁香酮 Acetosyringone 室温保存

2 ug pBBR1-MCS5 pBBR1-MCS5 低温运输,-20℃保存

1g 溶壁干粉 Lywallzyme Powder -20℃干燥保存(3个月以上),或4℃干燥保存(3个月以内)

2 ug pET-16b pET-16b 低温运输,-20℃保存

LAMVAB琼脂 LAMVAB Agar 250g

10g 尿酸 Uric Acid 室温保存

50T 转基因植物35S基因PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测试盒微量法Cripto-1(NT)  畸胎瘤衍化生因子抗体(N端) 规格: 0.2ml

APP/ABPP  淀粉样肽前体蛋白抗体 规格: 0.1ml

ALS2CR4  肌萎侧索硬化症相关蛋白4抗体 规格: 0.2ml

MEK1/MAPKK1/MEKK1  MEK1/MAPKK1抗体(N-端) 规格: 0.1ml

GIP  胃泌素抑制肽抗体 规格: 0.2ml

Cofilin  肌动蛋白结合蛋白CFL抗体 规格: 0.1ml

WIG-1/PAG608  野生型P53诱导基因1抗体 规格: 0.1ml

SCEL  SCEL蛋白抗体 规格: 0.2ml

FBXO11  F-box蛋白家族FBXO11抗体 规格: 0.2ml

PAX1  配对盒基因1抗体 规格: 0.1ml

IL-3R alpha/CD123  白介素3受体a链抗体 规格: 0.2ml

phospho-CDC27/ANAPC3(Ser427)  磷酸化后期促进复合蛋白3抗体 规格: 0.1ml

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