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线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 160
更新时间: 2022-05-24
描述:线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒微量法公司正在出售的产品:双岐杆菌生化用基础培养基 英文名称:The Biochemical Basis of Bifidobacterium Medium 产品规格:250g 双歧杆菌培养基 英文名称:Bifidobacterium Medium 产品规格:250g TPY肉汤 英文名称:TPY Broth 产品规格:250g TPY液体培养基 英文名称:TPY

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6583

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6583

商品介绍:

测定意义:

CA是线粒体三羧酸循环的个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况,(3)乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

测定原理:

CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

1个 1 uL超微量分光光度计  常温

100次  胎盘碱性检测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

100mL MES Buffer,0.5M,pH8.0  MES Buffer,0.5M,pH8.0  常温保存

100次 两栖和爬行类动物种属鉴定PCR Mix(线粒体CO1基因) Animal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

2 ug pMA-27s-2 pMA-27s-2 低温运输,-20℃保存

磁细菌分离培养基 Media for isolation of magnetotactic bacteria 100g

1瓶 SF767细胞株 SF767 低温运输和保存

叠氮葡萄糖肉汤  250g

5g β- 环状糊精 β-Cyclodextrin 室温干燥保存

50T 布鲁氏菌PCR试剂盒  低温运输,-20℃保存

10mL SDS-PAGE上样液,5× SDS-PAGE Loading Buffer,5× -20℃保存

线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒微量法LRRC10  富含亮重复蛋白10抗体 规格: 0.2mlDnmt3a  DNA甲基转移-3α抗体 规格: 0.2ml

Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr579)  磷酸化小板源性生因子受体B抗体 规格: 0.1mlCyclin H  周期素H抗体 规格: 0.2ml

IRAK4  白介素-1受体相关激4抗体 规格: 0.2mlAT1R/AGTR1  管紧张素Ⅱ-1型受体抗体 规格: 0.1ml

MMP-9  基质金属蛋白9抗体 规格: 0.1mlMCM3  微小染色体维持缺陷蛋白3抗体 规格: 0.2ml

Phospho-Btk(Ser180)  磷酸化蛋白酪激ATK抗体 规格: 0.1mlphospho-Gria2 (Ser880)  磷酸化谷受体2抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgG/FITC  FITC标记的兔抗鸡IgG 规格: 0.3mlKIF1B  驱动蛋白家族成员1B抗体 规格: 0.2ml

Astrocyte  人星形胶质细胞抗体 规格: 0.2mlSLC16A3/MCT4  单羧酸转运蛋白3/4抗体 规格: 0.2ml

CD98  CD98重链抗原抗体 规格: 0.1mlGNLY/NKG5  颗粒溶素抗体 规格: 0.1ml

Phospho-EGFR (Tyr1101)  磷酸化表皮生因子受体抗体 规格: 0.1ml

Mouse Anti-Goat IgG/FITC  FITC标记的小鼠抗羊IgG 规格: 0.3ml

Exportin 5  核输出蛋白5抗体 规格: 0.2ml

BECN1L1  Bcl-2同源结构域样蛋白1抗体 规格: 0.2ml

 


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