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甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 99
更新时间: 2022-05-24
描述:甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒微量法公司正在出售的产品:MFB培养基 英文名称:MFB Medium 产品规格:250g 含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE) 英文名称:Trypticase Soy-Yeast Extract Broth 产品规格:250g 含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE) 英文名称:Trypticase Soy-Yeast Extract Agar

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6591

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6591

商品介绍:

测定意义:

MCS广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,与柠檬酸合酶(CS)共同参与三羧酸循环的调节。

测定原理:

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰,进一步水解产生甲基柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

250μg 淀粉样 β- 蛋白片段 25-35 Amyloid β-Protein Fragment 25-35 -20℃保存

抗生素检定培养基7号 Antibiotic Agar NO.7 250g

1mL Protein A磁珠  

2 ug pTK-Hyg pTK-Hyg 低温运输,-20℃保存

100mL 土壤腐殖酸清除剂 Soil Humic Acid Erasol 常温

2 ug pDsRed2-Mito pDsRed2-Mito 低温运输,-20℃保存

梭菌强化琼脂 Reinforced Clostridium Agar 250g

5g  Sodium Cyanoborohydride  室温阴凉干燥保存

50T 乙型肝炎病毒cccDNA PCR测定试剂盒  低温运输,-20℃保存

200 mL 人中性粒细胞分离液1.085 Cell Separation Solution -20℃保存

察氏琼脂 Czapek Dox Agar 250g

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒微量法KLK8  激肽释放8抗体 规格: 0.2ml

ZFAND5  AN1型锌指蛋白5抗体 规格: 0.2ml

PIG3/TP53I3  p53诱导蛋白3抗体 规格: 0.2ml

P38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182)  磷酸化-丝裂原活化蛋白激p38抗体(P-p38 MAPK) 规格: 0.1ml

Phospho-Gab1 (Tyr627)  磷酸化接蛋白Gab 1抗体 规格: 0.1ml

ABHD5  自水解结构域5蛋白抗体 0.2ml

IL18BP  白细胞介素18结合蛋白抗体 规格: 0.1ml

RCAN2/DSCR1L1  钙调神经磷酸调节蛋白2抗体(唐氏综合征候选区域蛋白1样蛋白1) 规格: 0.1ml

Insulin Receptor Alpha  胰岛素受体α抗体 规格: 0.1ml

CYP19/CYP19A1  细胞色素P450 19抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/Bio  标记的兔抗猴IgG 规格: 0.1ml

SLC40A1  细胞膜铁转运蛋白FP1抗体 规格: 0.1ml

 


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