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异柠檬酸裂解酶(ICL)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 129
更新时间: 2022-05-24
描述:异柠檬酸裂解酶(ICL)测试盒微量法公司正在出售的产品:UVM添加剂1(萘啶酮酸4.5mg) 英文名称: 产品规格:1ml*5支 TSA-YE平板(9cm) 英文名称: 产品规格:9cm*10 GVPC琼脂基础 英文名称:GVPC Agar Base 产品规格:100g BCYE琼脂基础 英文名称:BCYE Agar Base 产品规格:100g

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6597

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

异柠檬酸裂解酶(ICL)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6597

商品介绍:

测定意义:

ICLEC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物种子在萌发过程中,通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL是乙醛酸循环的关键酶之一。

测定原理:

ICL催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和NADHLDH的作用下生成乙醇和NADNADH340nm下有特征吸收峰,监测340nm吸光度的减小速率可间接反应ICL活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

2 ug pLOX-Ttag-iresTK pLOX-Ttag-iresTK 低温运输,-20℃保存

醛类中和剂管  9ml*20

1瓶 MA-891细胞株 MA-891 低温运输和保存

普通琼脂 Nutrient Agar 250g

1mg 磷脂 A2 Phospholipase A2  4℃保存

25mL TBE Sample Buffer,6X  TBE Sample Buffer,6X  常温保存

100次 包涵体蛋白溶解及复性套装 Inclusion Body Protein Solubilization & Refolding Pack 常温保存

2 ug pSUPER-basic pSUPER-basic 低温运输,-20℃保存

100mL 酸 Acidic Phenol 常温避光保存

2 ug pCMV-TK-Luc + pCMV-TK-Luc + 低温运输,-20℃保存

B(1万单位) Polymyxin B 1万单位*5支

异柠檬酸裂解酶(ICL)测试盒微量法Sclerostin  骨形态发生抑制蛋白SOST抗体 规格: 0.2ml

Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的兔抗豚鼠IgM 规格: 0.1ml

Cadherin 8  钙粘附蛋白8抗体 规格: 0.2ml

phospho-SHC (Tyr317)  磷酸化SH2结构域转化蛋白1抗体 规格: 0.1ml

SLC39A7  转运蛋白家族39成员7抗体 规格: 0.2ml

Mouse IgA  兔抗小鼠IgA抗体 规格: 0.2ml

TRPM8  “冷"蛋白TRPM8抗体 规格: 0.2mlCTGFL  结缔组织生因子样蛋白抗体 规格: 0.2ml

PNMT  苯乙醇胺甲基转移抗体 规格: 0.2mlSIRT7  沉默调节样蛋白SirT7抗体 规格: 0.2ml

FRMD6  FRMD6蛋白抗体 规格: 0.2mlHNF4/TCF4/HNF4A  肝细胞核因子4α抗体 规格: 0.1ml

LATS2  瘤抑制基因LATS2抗体 规格: 0.2mlMouse Anti-human IgM/Gold  胶体金标记的小鼠抗人IgM 规格: 2ml

Rabbit Anti-dog IgG/PE  PE标记的兔抗狗IgG 规格: 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的兔抗猪IgG 规格: 0.1ml

Calmodulin/CaM I  钙调节素抗体(钙调蛋白/钙调素) 规格: 0.1mlphospho-SIRT6(Ser338)  磷酸化沉默调节相关蛋白6抗体 规格: 0.1ml

 


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