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3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 152
更新时间: 2022-05-24
描述:3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测试盒微量法公司正在出售的产品:含青的TSA表面接触皿(55cm) 英文名称: 产品规格:10个/包 大豆酪蛋白琼脂(TSA)培养基平板(15cm) 英文名称: 产品规格:10个/包 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(新药典) 英文名称: 产品规格:250g 液体硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂) 英文名称:Thioglycollate Medium(without Agar)

产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6611

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6611

商品介绍:

测定意义:

GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。

测定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。

需自备的仪器和用品

分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

氧化试剂  1g

5g 8- 羟基硫酸盐 8-Hydroxyquinoline Sulfate   室温避光保存

50T 蜡样芽孢杆菌PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

5g 3-(3,4- 二羟基苯 )-L-  3-(3,4-Dithydroxyphenyl)-L-Alanine  室温干燥保存

100mL ADA Buffer,0.5M,pH7.4   ADA Buffer,0.5M,pH7.4   常温保存

10mL DNA上样液 (红色),6× DNAON  4℃保存

2 ug pGBKT7-Lam pGBKT7-Lam 低温运输,-20℃保存

液体乳糖培养基 Fluid Lactose Medium 250g

1瓶 COS-7 SV40细胞株 COS-7 SV40 低温运输和保存

PALCAM琼脂平板(9cm) PALCAM Agar 10个/包

500U 热敏 Antarctic Phosphatase -20℃保存

3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测试盒微量法RSL1D1  细胞衰老抑制基因蛋白抗体 规格: 0.2mlMouse Anti-Bov IgG/APC  APC标记的小鼠抗牛IgG 规格: 0.1ml

PYGM  肌肉糖原磷酸化抗体 规格: 0.2mlSCF  干细胞生因子抗体 规格: 0.1ml

MAGE-1  黑色素瘤相关抗原抗体 规格: 0.1mlphospho-MEF2C(Thr300)  磷酸化肌细胞增强因子2C抗体 规格: 0.1ml

phospho-Kidins220 (Ser918)  磷酸化220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗体 规格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的驴抗人IgG 规格: 0.1ml

DNase I  脱氧核糖核酸1抗体 规格: 0.2mlTPD52L1/D53  瘤蛋白D53抗体 规格: 0.2ml

KLF9/BTEB1  转录因子KLF9抗体 规格: 0.1mlPhospho-Stat2 (Tyr690)  磷酸化信号转导和转录激活因子2抗体 规格: 0.1ml

PDLIM3/ALP  辅肌动蛋白相关LIM蛋白抗体 规格: 0.2mlFAM81A  FAM81A蛋白抗体 规格: 0.2ml

IDH3A  草酰琥珀酸脱羧α抗体 规格: 0.2mlPhospho-mu Opioid Receptor (Ser375)  磷酸化µ-型片受体抗体 规格: 0.1ml

Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1798)  磷酸化结节性硬化蛋白抗体 规格: 0.1mlPPAR gamma  过氧化活化增生受体γ抗体 规格: 0.2ml

ANKMY1  睾特异性锚样蛋白1抗体 规格: 0.2mlphospho-SOX9(Ser181)  磷酸化转录因子SOX9蛋白抗体 规格: 0.1ml

NFIC  核因子1C型抗体 规格: 0.2mlNuMA  核有丝分裂器NuMA蛋白抗体 规格: 0.2ml

NT/NTS1/NTRH  神经降压素抗体 规格: 0.1mlPhospho-FGFR1(Tyr653/654)  磷酸化碱性成纤维细胞生因子受体1抗体 规格: 0.1ml

 


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