磷脂酶D（PLD）测试盒微量法

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

商品介绍：

试剂组成和配制:

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

实验结果判断我有妙招：

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。

3、以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性，P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑，P／N小于1．5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照，与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求：

① 易挥发、低燃点的试剂要密封，放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气，水发生反应的物质要密封，并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂，应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放其水溶液，亚硫酸，氢硫酸溶液要密封存放，钾，钠，白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存，其相应的溶液较固体更易反应，所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封，放于阴凉通风处保存。

操作步骤：

1. 样品的准备：

a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

1 mg Rhod-2，三钠盐 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

250mL Carbonate Buffer（盐缓冲液）,0.5M,pH9.5   Carbonate Buffer,0.5M,pH9.5   常温保存

25mL 亲和硅烷  Binding Silane 常温

2 ug pGTf2 pGTf2 低温运输，-20℃保存

盐琼脂 Mannitol Salt Agar 250g

1瓶 HP615细胞株 HP615 低温运输和保存

瓷珠菌种保存管（50支） Strain Store Medium 50支/盒

10g 干粉 Lysozyme Powder 4℃或-20℃保存

250mL Sodium Bicarbonate Buffer（钠缓冲液），1M，pH9.0   Sodium Bicarbonate Buffer，1M，pH9.0   常温保存

1 管 Rosetta-gamiB(DE3)plysS大肠杆菌 Rosetta-gami B(DE3)plysS E.coli Strain -80℃保存

2 ug pSos MAFB pSos MAFB 低温运输，-20℃保存

磷脂酶D（PLD）测试盒微量法CD46/MCP  膜辅蛋白抗体 规格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的小鼠抗人IgG 规格: 0.1ml

ALDH1  乙醛脱1型抗体 规格: 0.2ml

IGSF2/CD101  CD101抗体 规格: 0.2ml

CENPF  有丝分裂着丝粒蛋白F抗体 规格: 0.2ml

WNT5A  信号通路Wnt5a抗体 规格: 0.1ml

Phospho-Mre11 (Ser676)  磷酸化DNA损伤关键蛋白Mre11抗体 规格: 0.1ml

Natriuretic Peptide Receptor A  利钠肽受体A抗体 规格: 0.2ml

Tetraspan 5  四分子交联体5抗体 规格: 0.1ml

gamma crystallin S  γ晶状体蛋白S抗体（γS-crystallin） 规格: 0.2ml

FAM120B  组织激活过氧化活化增生受体γ蛋白抗体 规格: 0.2ml

WSB2/WD SOCS box protein 2  信号传导抑制蛋白WD重复蛋白2抗体 规格: 0.2ml