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丙酮酸羧化酶(PC)测试盒紫外分光光度法

简要描述:丙酮酸羧化酶(PC)测试盒紫外分光光度法公司正在出售的产品:结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂进口、国产VRBG Agar250克奶粉中坂崎杆菌的分离培养哥伦比亚CAN琼脂基础进口、国产Columbia CAN Agar Base250克分离革兰氏阳性球菌滤膜粪大肠菌琼脂进口、国产M-FC Agar250克大肠杆菌群的滤膜法检测滤膜粪大肠菌肉汤进口、国产M-FC Broth250克大肠杆菌群的滤膜法检测

  • 产品型号:
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2023-12-24
  • 访  问  量:457

详细介绍

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

丙酮酸羧化酶(PC)测试盒紫外分光光度法

50管/48样

紫外分光光度法

BK-01S6979

商品介绍:

测定意义:

丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylasePCEC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中,催化丙酮酸、ATPCO2和水生成草酰乙酸、ADPPi,是糖异生过程的个限速酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

测定原理:

PC催化丙酮酸、ATPCO2和水生成草酰乙酸、ADPPi,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm下测定NADH氧化速率,即可反映PC活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

2 ug pP-αSUMO3 pP-αSUMO3 低温运输,-20℃保存

葡萄糖铵  20支

2 ug pCaspase3-sensor pCaspase3-sensor 低温运输,-20℃保存

副溶血性弧菌成套生化鉴定管(HRGB)  10种*2套/盒*5盒

25mg 牛胰岛素 Insulin From Bovine Pancreas -20℃保存

50T 流感嗜血杆菌B型PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

5mL 间充质干细胞软骨细胞分化生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

25g Ammonium Persulfate Solution(过硫酸铵溶液),10% Ammonium Persulfate Solution,10% 常温保存

10mL DNA尿素-PAGE上样液 DNA Urea-PAGE Loading Buffer -20℃保存

2 ug pGC-silencer-U6-GFP pGC-silencer-U6-GFP 低温运输,-20℃保存

麦迪、麦白检定(普通轻质斜面) Wheat albomycin Test Medium 250g

丙酮酸羧化酶(PC)测试盒紫外分光光度法CCDC8  卷曲螺旋结构域蛋白8抗体 规格: 0.2mlPCDHA8  原钙粘附蛋白α8抗体 规格: 0.2ml

NDUFAF4  激素调节增值细胞相关蛋白抗体 规格: 0.2mlRSRC2  食道抑制生蛋白抗体 规格: 0.2ml

large S protein  人乙肝毒pre S1/S2蛋白抗体 规格: 0.1mlCDK5  周期素依赖性激5抗体 规格: 0.1ml

MLK2/MAP3K10  丝裂原活化蛋白激3K10抗体 规格: 0.2mlNucleolin/C23  核仁蛋白C23抗体 规格: 0.2ml

AMBRA1  自噬相关基因AMBRA1抗体 规格: 0.2mlAPS  APS抗体 规格: 0.1ml

GRP  促胃泌素释放肽抗体 规格: 0.2mlAPH1a  早老素γ分泌抗体 规格: 0.2ml

IQCG  IQCG蛋白抗体 规格: 0.2mlSOSSC/C9orf80  单链DNA结合蛋白相互作用蛋白1 规格: 0.2ml

phospho-PRKCA(Ser657+Tyr658)  磷酸化蛋白激C抗体 规格: 0.1mlPhospho-PAK4(Ser99)  磷酸化p21激活激4抗体 规格: 0.1ml

PDZD7  PDZ结构域PDZK7蛋白抗体 规格: 0.2mlCIDE A  DNA断裂因子相似蛋白A抗体 规格: 0.2ml

phospho-PTK2(Tyr576+Tyr577)  磷酸化粘着斑激抗体 规格: 0.1mlGlycerol kinase  甘油激抗体 规格: 0.2ml

ATG1/ULK1  自噬相关蛋白1抗体 规格: 0.2mlPRR11  富含脯蛋白11抗体 规格: 0.2ml

TSHR  促甲状素受体抗体 规格: 0.1mlMAGEA10  黑色素瘤相关抗原10抗体 规格: 0.2ml

 


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