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糖原合成酶(GCS)测试盒微量法

产品厂地: 上海市
访问次数: 141
更新时间: 2022-05-30
描述:Hautriwaic acid公司其它产品SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 细胞裂解液 (阳性对照) 透析袋3000200u
脐静脉内皮细胞;HUV-EC-C2.4.6-三肖基本磺醋溶液(-20℃) 2,4,6-TRInitnOBqNZqNqSULFONIC cCID 208-19-
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产品介绍

品牌其他品牌货号BK-01S6980

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:糖原合成酶(GCS)测试盒微量法

产品规格:100管/96样

检测方法:微量法

产品货号:BK-01S6980

产品分类:糖原系列
商品介绍:

测定意义:

GCSEC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,以α-14-糖苷键相连延长糖链,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰岛素作用的主要靶酶,对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。

测定原理:

GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

QQ截图20220307153537.png 

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

1瓶 Daoy细胞株 Daoy 低温运输和保存

TSA平板(9cm) TSA 10个/包

200U T4 DNA连接(T4 DNA Ligase) T4 DNA Ligase -20℃保存

125mL PIPES Lysis Buffer with NP-40,2X PIPES Lysis Buffer with NP-40,2X 常温保存

1mL 博莱溶液,10mg/mL Bleomycin Solution -20℃避光保存

2 ug pPICZα B pPICZα B 低温运输,-20℃保存

0.4mg无菌水溶液  0.4mg/支*20

2 ug pCAGGS pCAGGS 低温运输,-20℃保存

副溶血性弧菌琼脂 Vibrio parahaemolyticus agar 250g

100mg 透明质酸 Hyaluronidase -20℃保存

50T 口蹄疫病毒A亚型PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

糖原合成酶(GCS)测试盒微量法Rabbit Anti-dog IgG/Cy5  Cy5标记的兔抗狗IgG 规格: 0.1mlNSMase2  中性鞘磷脂2抗体 规格: 0.2ml

Calponin 1/COLP  钙调节蛋白-1抗体 规格: 0.1mlMEI-1  减数分裂缺陷蛋白1抗体 规格: 0.2ml

C16orf7/ATP-BL   16号染色体开放阅读框7抗体 规格: 0.2ml

Shrimp tropomyosin  南美白对虾过敏原蛋白(虾原肌球蛋白)抗体 规格: 0.1ml

GHDC  GHDC蛋白抗体 规格: 0.2ml

Phospho-Met (Tyr1003)  磷酸化肝细胞生因子受体(原基因)抗体 规格: 0.1ml

EIF5  真核翻译起始因子5抗体 0.2ml

Goat Anti-Bovine IgG/Cy3  Cy3标记的羊抗牛IgG 规格: 0.1ml

LRFN3/SALM4  神经突触粘附样分子4抗体 规格: 0.2ml

LRP12  脂蛋白受体相关蛋白12抗体(抑制瘤蛋白7) 规格: 0.2ml

phospho-MARK2(Thr595)  磷酸化丝/苏蛋白激MARK2抗体 规格: 0.1ml

ERα/ESR1  雌激素受体α抗体 规格: 0.1ml 

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

 


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