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技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
猪瘟病毒PCR检测试剂盒价格 | Classical Swine Fever Virus(CSFV)RTPCR | BK-P8998 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
* CAS * 规格: 100mg
右* CAS * 规格: 100mg
* CAS 50-78-2 * 规格: 200mg
司可钠 CAS * 规格: 100mg
依米星 CAS * 规格: 200mg
补骨脂素 CAS 66-97-7 * 规格: 20mg
垂体后叶 CAS * 规格: 约30mg
满山红(兴杜鹃) CAS * 规格: 5g
麦芽三糖 CAS * 规格: 100mg
维生素K1 CAS * 规格: 100mg
7-表-10-去乙酰基* CAS * 规格: 20mg
利福B CAS * 规格: 100mg
紫金龙 CAS * 规格: 0.5g
何首乌 CAS * 规格: 0.5g
烯化合物(地芬多杂质) CAS * 规格: 100mg
猪瘟病毒PCR检测试剂盒价格3,5-二氟三氟 182.09 3,5- two f three f*:401-85-4分子量: C7H3F5
萘 Naphthalene*:分子量:
碳酸氢钾 100.12 Potassium hydrogen carbonate*:298-14-6分子量: KHCO3
2-氯-5-硝吡 158.54 2- -5- nitro pyridine*:4548-45-2分子量: C5H3ClN2O2
2-乙吡 107.15 2- ethyl pyridine*:100-71-0分子量: C7H9N
二甲臢新四唑 598.71 Two new triazole formazen*:21520-87-6分子量: C38H30N8
4,4'-二 168.28 4,4'- two piperidine*:15336-72-8分子量: C10H20N2
1-(3-丙)咪唑 125.17 1 -(3 -丙)咪唑*:5036-48-6分子量: C6H11N3
双(2-甲-3-呋) 226.31 Bis (2- -3-) two*:28588-75-2分子量: C10H10O2S2
5-氟硝 213.06 5- f*:880-78-4分子量: C6F5NO2
2-氯-5-甲氧并咪唑 182.61 2- chloro -5- methoxy benzimidazole*:15965-54-5分子量: C8H7ClN2O
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