气肿疽梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

蛋白胨水 (靛基质培养基) 规格： 100g 用途： 供鉴别细菌能否产生靛基质的生化反应

TT(人甲状腺导管细胞)酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

克氏柠檬酸培养基/Christensen Citrate Medium肠杆菌鉴别250克国产/进口

碱性琼脂平板/Alkaline Agar用于分离霍乱弧菌250克国产/进口

Endogenous Enzymes Blocking Buffer/内源性过氧化物酶封闭10ml

七号胆/7号胆/胆7号/胆酸-脱氧胆混合物/Bile salt No.7BR25克国产/进口

OVCAR-3(人卵巢细胞)5×106cells/瓶×2

小鼠肺大静脉内皮细胞*培养基LLC-MK2(恒河猴肾细胞)

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

叙利亚仓鼠肾细胞英文名称：BHK-21

瘤菌 Rhizobium sp.

气肿疽梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒规格4--3-硝吡  139.11  4- amino -3- nitro pyridine*：1681-37-4分子量： C5H5N3O2

祖师麻甲素(瑞香素）  Founder Ma Jiasu (daphnetin)  178.144分子量：C9H6O4*：486-35-1

莫西克汀  Moshe Curtin  639.82分子量： C37H53NO8*：507-06-5

芽孢染色  Spore staining solution  分子量：*：67ykh

乙  60.1  Ethyl hydrazine*：624-80-6分子量： C2H8N2

1-脱氧野尻霉素  1- deoxynojirimycin  163.17172分子量：C6H13NO4*：19130-96-2

1-甲-3-甲酸甲酯  157.21  1- methyl -3- methyl piperidine*：1690-72-8分子量： C8H15NO2

5--3-溴-2-氯吡  207.46  5- amino -3- -2-*：130284-53-6分子量： C5H4BrClN2

2,3-双(3-氟)-5-氯四氮唑  370.79  2,3- (double 3- difluorophenyl) -5- 5-triphenyl tetrazolium chloride*：zx8分子量： C19H13ClF2N4

1-甲-5-(三正丁锡)咪唑  371.15  1- methyl -5- (tributylstannyl) imidazole*：147716-03-8分子量： C16H32N2Sn

1-溴-3-n-己    1- -3-n- cyclohexyl benzene bromide*：38409-59-5分子量： C12H17Br

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。