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豚鼠ELISA试剂盒正确的操作步骤及注意事项

时间:2022-11-24 浏览次数:53

  豚鼠ELISA试剂盒具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点,适合于大批标本的检测,广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的,它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质变得轻而易举,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。既不影响抗原抗体反应的特异性,也不改变酶本身的活性。
  豚鼠elisa试剂盒的操作步骤
  1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,第二孔中分别加标准品100μl,然后第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为30ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L,2.5ng/L)。
  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  7.温育:操作同3。
  8.洗涤:操作同5。
  9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  豚鼠elisa试剂盒注意事项
  1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
  3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间建议控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  4、请每次测定的同时做标准曲线,建议做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数。
  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6、底物请避光保存。
  7、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

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