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疱疹病毒PCR检测试剂盒操作反应五要素

更新时间:2021-03-03      点击次数:398

疱疹病毒PCR检测试剂盒操作反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

 兔子免疫球蛋白A(IgA)elisa试剂盒 
兔子可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)elisa试剂盒
兔子可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)elisa试剂盒
兔子可溶性E选择素(sE-selectin)elisa试剂盒
兔子巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa试剂盒
兔子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)elisa试剂盒 
 兔子免疫球蛋白M(IgM)elisa试剂盒 
兔子甲状腺素(T4)elisa试剂盒
兔子基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)elisa试剂盒
兔子基质金属蛋白酶9(MMP-9)elisa试剂盒
兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)elisa试剂盒
兔子基质金属蛋白酶5(MMP-5)elisa试剂盒
兔子睾酮(T)elisa试剂盒
兔子肝细胞生长因子(HGF)elisa试剂盒
兔子γ干扰素(IFN-γ)elisa试剂盒 
兔子端粒酶(TE)elisa试剂盒
兔子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa试剂盒
兔子促肾上腺皮质激素(ACTH)elisa试剂盒
兔子促卵泡素(FSH)elisa试剂盒
兔子促甲状腺素(TSH)elisa试剂盒
兔子雌二醇(E2)elisa试剂盒
兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)elisa试剂盒
兔子表皮生长因子(EGF)elisa试剂盒 
兔子白血病抑制因子受体(LIFR)elisa试剂盒

 

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