从样本到结果：仓鼠ELISA试剂盒完整使用指南

 

　　实验前准备是基础，需兼顾试剂盒、样本与环境三方适配。首先核对试剂盒完整性，确认包被板、酶标试剂、标准品、显色液、终止液等组分齐全，且均在有效期内，储存条件符合说明书要求（通常2-8℃冷藏，避免反复冻融）。仓鼠样本类型多样，血清、血浆、组织匀浆等需针对性处理：血清样本需室温静置30分钟后离心分离，血浆需选用合适抗凝剂（如EDTA、肝素）并及时离心，组织样本需用生理盐水研磨制成匀浆，全程保持低温避免蛋白降解。同时准备移液器、离心机、酶标仪等仪器，校准移液器精度，预热酶标仪至检测波长（常见450nm，以说明书为准），实验环境保持洁净、室温稳定在20-25℃。

 

　　核心操作步骤需严格遵循说明书，精准控制每一步细节。第一步是标准品稀释，将冻干标准品用专用稀释液复溶后，按梯度稀释成系列浓度，做好浓度标记，避免混淆。第二步加样，用移液器将标准品、待测样本分别加入包被板孔中，每孔加样量需精准（通常50-100μL），空白孔仅加稀释液，轻轻振荡包被板使样本均匀分布，加盖后在37℃温育30-60分钟（温育时间与温度直接影响抗原抗体结合效率，不可随意更改）。

 

　　温育结束后进行洗板操作，这是减少非特异性结合、降低实验误差的关键。用洗涤液充分洗涤每孔，浸泡1-2分钟后弃去液体，重复3-5次，最后一次洗涤后将板倒置在吸水纸上拍干，避免孔内残留液体影响后续反应。随后加入酶标试剂，每孔按规定量添加，振荡混匀后37℃温育15-30分钟，再次重复洗板流程。

 

　　显色与终止环节需快速精准，避免反应过度。加入显色液后轻轻振荡，37℃避光温育10-15分钟，待标准品孔出现明显梯度颜色变化时，立即加入终止液终止反应，终止液加入后颜色会由蓝色转为黄色，需在15分钟内进行检测。最后将包被板放入酶标仪，读取各孔吸光度（OD值），空白孔调零，记录实验数据。

 

　　结果分析与实验收尾同样不容忽视。以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线，通过曲线方程计算待测样本中目标物质的浓度。同时需核对实验有效性，确保标准曲线相关系数（R²）≥0.98，空白孔OD值符合说明书要求。实验结束后，及时清洗包被板与实验器具，废弃样本与试剂按生物安全规范处理，整理实验数据并做好记录，包括试剂盒批号、样本信息、操作时间等，便于后续追溯。

 

　　此外，需注意仓鼠样本可能存在的个体差异，建议设置复孔（每样本3-4孔）减少误差；操作过程中移液器枪头需一次性使用，避免交叉污染；若实验结果异常，需排查样本处理、温育时间、洗板效果等关键环节。遵循本指南规范操作，可充分发挥仓鼠ELISA试剂盒的检测优势，为实验研究提供可靠的数据支撑。