在操作AtT-20小鼠垂体瘤细胞时，需特别注意细胞的传代与冻存环节。由于该细胞系对培养环境较为敏感，传代时应避免过度消化，建议使用0.25%-EDTA溶液轻柔处理30秒至1分钟，并在显微镜下观察细胞形态变化，及时加入含血清的培养基终止消化。离心后重悬细胞时，动作需轻柔，以减少机械损伤对细胞活性的影响。
此外，冻存AtT-20细胞时，冻存液的配制比例尤为关键。推荐使用90%培养基与10%DMSO的混合液，并确保细胞密度控制在1×10^6/mL左右。冻存程序需严格遵循梯度降温原则，先置于4℃冰箱平衡30分钟，再转移至-80℃过夜，最后放入液氮长期保存。复苏时需快速解冻，并立即用预温的培养基稀释以降低DMSO毒性。
实验过程中还需警惕支原体污染问题。建议定期进行支原体检测，并在培养基中添加1%双抗作为预防措施。若细胞状态异常(如增殖迟缓、空泡化)，应暂停实验并排查污染源。
为维持AtT-20细胞的激素分泌特性，建议每代次进行功能验证(如ACTH分泌检测)，避免长期传代导致表型漂移。通过规范操作与细节把控，可显著提升实验的可重复性与数据可靠性。
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