一氧化氮NO测试盒一步法

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仪器：
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为550nm）
2、恒温水浴箱或气浴箱 （孵育温度为37℃）
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理：
血清（浆）可直接测定。
红细胞：需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本：可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理：参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。

测定步骤：
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.加温
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
优点如下：
1、快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。
2、取样量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD，0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高：IC50=0.05g/ml，是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
5、再现性好：变异系数CV=1.7%。
6、回收试验： X =103.3%。
7、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
8、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等，效果均佳。
A7r5(大鼠胸大动脉平滑肌细胞) 5×106cells/瓶×2羧基甲氧基胺半盐酸盐(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)Carboxymethoxylamine Hemi

HUF Pellet 人成纤维细胞团块 > 1 mio.cells 人内皮细胞裂解物HLECL吉拉德试剂 P(>95.0%(T))质量规格：>95.0%(T)Girard's Reagent P

CL-0194RF/6A(猴视网膜血管内皮细胞)5×106cells/瓶×24-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量：23.50-24.30 %)质量规格：含氮量：23.50-24.30 %4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione

TCN2 Others Human 人 TCN2 / anscobalamin-II CHO细胞裂解液 (阳性对照) N-叔丁基-α-苯基硝酮(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)N-tert-Butyl-α-phenylnitrone

人脉络丛上皮细胞cDNAHCPEpiC cDNA4-伞形酯-N-乙酰-b-D-氨基半乳糖苷(>98%,BR)质量规格：>98%,BR4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-galactosaminide
小鼠小肠隐窝上皮细胞*培养基 100mLxy7noXYetxylCELLULOSE纤维素高级米白色至黄色粉末RTsigma

Hepa 1-6小鼠肝癌细胞 Hepa mouse hepatoma cell line 1-6 DMEM+10%FBS溴酚绿;溴酚蓝;四溴间酚磺酞 BroMocrqsol o7ium sclt;3,3′,5,5′-TqtrcbroMo-M-crqsol sulfoncphthclqin 76-60-8

IL6 Protein Mouse 重组小鼠 IL6 / Ierleukin-6 蛋白酸性品红 Acid Fuchsin (Dye content, Approx.70%) 3244-88-0 25G 染色剂

Romas(人瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 WI-38(人二倍体胚肺细胞)间环，英文名或英文缩写：3-metxylcyclohexanol，级别：GR，99.8%，规格：100克

CL-0124IMR-32(人神经母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2MSMedium 10L/50L Sigma M5524
JAR(人胎盘绒毛膜癌细胞) 5×106cells/瓶×2 MG-63, 人骨肉瘤细胞 人胃腺癌细胞;BGC-823苏丹容量：50毫克

人肾近曲小管上皮细胞总RNAHRPTEpiC NAD-乳酸脱氢酶 D-Lactic Dehydrogenase 9028-36-8 1KU 通用试剂

BST1 Others Rat 大鼠 CD157 / BST1 人细胞裂解液 (阳性对照) 异恶草安 ISOXcBqN 8228-20-7

人滑膜细胞*培养基 100mL5ˊ-嶙酸脱氧胞苷，英文名或英文缩写：Dcmp，级别：BR，99%，规格：500U

CHO-pt细胞，转血小板基因仓鼠卵巢细胞 L6(大鼠成肌细胞) 615小鼠癌瘤株;Ca761(L-赖酸盐酸盐)
一氧化氮NO测试盒一步法鱼源细胞地奈德标记13C3Desonide - Labeled 13C3质量规格：美国进口

DPP4 Others Human 人 DPPIV / DPP4 / CD26 人细胞裂解液 (阳性对照) L-顺式-盐酸地尔硫卓L-cis-Diltiazem • HCl质量规格：美国进口

人卵巢表层上皮细胞HOSEpiC地尔硫卓Diltiazem质量规格：美国进口

PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 去乙酰地尔硫卓-d3Desacetyl Diltiazem-d3质量规格：美国进口

大鼠肠平滑肌细胞*培养基 100mLO-去地尔硫卓O-Desmethyl Diltiazem质量规格：美国进口
实验通用规则：
1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的，要在临用前现配。