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当前位置:首页   >  产品中心  >  细胞  >  细胞系  >  5×106cells/瓶293T(人胚肾细胞)

293T(人胚肾细胞)

简要描述:巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa检测试剂盒 英文名称 :MIP-5 ELISA Kit,英文缩写:MIP-5,

胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)elisa检测试剂盒 英文名称 :GDNF ELISA Kit,英文缩写:GDNF,

激肽释放酶11(KLK 11)elisa检测试剂盒 英文名称 :KLK 11 ELISA Kit,英文缩写:KLK 11,

肌球蛋白轻链(MLC)

  • 产品型号:5×106cells/瓶
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2023-12-17
  • 访  问  量:1902

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详细介绍

操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ,计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。

在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

产品名称

 293T(人胚肾细胞)

规格

5×106cells/瓶

货号

 BK-X87414

产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。

培养:
1.取出小鼠后沥干酒精,放入超净台内,固定在泡沫板上。
2.用镊子提起皮肤,用解剖剪剪开皮肤一个横切口,将皮肤向上撕开,然后剪开肌肉等,暴露出腹腔,在左侧找到脾脏,用弯头眼科镊取出脾脏,置于无菌培养皿中。
3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次,并剔除多余无用的组织。
4.将筛网置于平皿中,脾脏置于筛网上,用弯头镊镊住,轻轻在筛网上进行碾磨,同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。
5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中,离心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培养液,吹打混匀,取样计数。
7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中,轻轻摇晃混匀,在培养瓶上。
实验事项:
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2.   加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

EC-MUG培养基(100g)  100g

MUG营养琼脂(NA-MUG培养基)  250g

MUG营养琼脂 MUG Nutrient Agar 100g

肠球菌显色培养基  1000ml

MEI培养基 MEI Medium 1000ml

念珠菌显色培养基 Candida Chromogenic Medium 1000ml

大肠杆菌/大肠菌群液体显色培养基 E.Coli/Coliform Broth Chromogenic Medium 1000ml

MUGal肉汤 MUGal Broth 100g

细菌总数显色培养基(不含琼脂)  250g

蜡样芽孢杆菌显色培养基(第三代)  1000ml

即用型平板培养基  

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂(YPD)平板  9cm*10/包

血平皿(9cm) Blood Agar Plates 无

哥伦比亚血琼脂平板(9cm) Columbia Blood Agar 5个/包

293T(人胚肾细胞)巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa检测试剂盒 英文名称 :MIP-5 ELISA Kit,英文缩写:MIP-5,

胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)elisa检测试剂盒 英文名称 :GDNF ELISA Kit,英文缩写:GDNF,

激肽释放酶11(KLK 11)elisa检测试剂盒 英文名称 :KLK 11 ELISA Kit,英文缩写:KLK 11,

肌球蛋白轻链(MLC)elisa检测试剂盒 英文名称 :MLC ELISA Kit,英文缩写:MLC,

核因子κB受体活化剂配体(RANKL)elisa检测试剂盒 英文名称 :RANKL ELISA Kit,英文缩写:RANKL,

骨退化特异标志物(CTX-2)elisa检测试剂盒 英文名称 :CTX-2 ELISA Kit,英文缩写:CTX-2,

高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)elisa检测试剂盒 英文名称 :U-TSH ELISA Kit,英文缩写:U-TSH,

钙联蛋白(calnexin)elisa检测试剂盒 英文名称 :calnexin ELISA Kit,英文缩写:calnexin,

泛素分解酶(DUB)elisa检测试剂盒 英文名称 :DUB ELISA Kit,英文缩写:DUB,

凋亡相关因子(Fas)elisa检测试剂盒 英文名称 :Fas ELISA Kit,英文缩写:Fas,

蛋白二硫化物异构酶前体(PDI)elisa检测试剂盒 英文名称 :PDI ELISA Kit,英文缩写:PDI,

促性腺激素释放激素(GnRH)elisa检测试剂盒 英文名称 :GnRH ELISA Kit,英文缩写:GnRH,

肠三叶因子(ITF)elisa检测试剂盒 英文名称 :ITF ELISA Kit,英文缩写:ITF,

表皮细胞活化肽因子(CAPF)elisa检测试剂盒 英文名称 :CAPF ELISA Kit,英文缩写:CAPF,

 

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