沿岸单孢子虫PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

对香豆酸;4-Hydroxycinnam CAS 501-98-4 *  规格： 20mg

次黄嘌呤;6-Hydroxypurine CAS 68-94-0 *  规格： 20mg

重楼皂苷Ⅶ;Polyphyllin VI CAS 76296-75-8 *  规格： 20mg

白花前胡素E;Praeruptorin CAS 78478-28-1 *  规格： 20mg

补骨脂酚;Bakuchiol CAS 10309-37-2 *  规格： 20mg

五脂素;Anwuligan CAS 107534-93-0 *  规格： 20mg

喹;纯品型;标准品;有证书 CAS 23696-28-8 *  规格： 0.1g

磷;纯品型;标准品;有证书 CAS  *  规格： 0.1g

敌草快;纯品型;标准品;有证书 CAS 6385-62-2 *  规格： 0.1g

嗪草;纯品型;标准品;有证书 CAS 21087-64-9 *  规格： 0.1g

恶霜灵;纯品型;标准品;有证书 CAS 77732-09-3 *  规格： 0.1g

丙嘧草酯;纯品型;标准品;有证书 CAS 134605-64-4 *  规格： 0.1g

;纯品型;标准品;有证书 CAS 80844-07-1 *  规格： 0.1g

解草唑;纯品型;标准品;有证书 CAS 99607-70-2 *  规格： 0.1g

成分度标准物质;有证书 CAS 52645-53-1 *  规格： 0.25g

沿岸单孢子虫PCR检测试剂盒说明书杆菌属 Lactobacillus sp.胶韧革菌 Gloeostereum incarnatum

根瘤菌Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)

USMC(大鼠血管平滑肌细胞)大鼠食管平滑肌细胞*培养基

热带假丝酵母 Candida tropicalis树状黄杆菌 Flavobacterium arborescens

毛柄金钱菌(金针菇)中慢生华癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicumNCI-H524(人非小细胞肺细胞)

HO-8910(人卵巢细胞)杆菌属 Lactobacillus sp.

酸片球菌 Pediococcus acidilactici苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

苜蓿中华根瘤菌NCI-H524(人非小细胞肺细胞)

SK-BR-3(人腺细胞)苏云金芽孢杆菌肯尼亚亚种 Bacillus thuringiensis subsp. Kenyae

戊糖片球菌 Pediococcus pentosaceus金色横裂链霉菌 Streptomyces aureosegmentosus

毛柄金钱菌(金针菇) Flammulina velutipes异常汉逊酵母 Hansenula anomala

镰刀菌 Fusarium sp.真姬菇 Hypsizigus marmoreus

A172(人脑胶质瘤细胞)B16-F10(小鼠皮肤黑色素瘤细胞)

挪威假丝酵母 Candida norvegensis酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti红曲霉 Monascus anka

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。