禽腺病毒通用PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

异土木香内酯 CAS 470-17-7 *  规格： 20mg

川芎对照药材 CAS  *  规格： 1g

穿山龙 CAS  *  规格： 5g

朝藿定B CAS 110623-73-9 *  规格： 20mg

酸软骨素钠 CAS  *  规格： 250mg

桤木 CAS  *  规格： 20mg

甲胎蛋白(AFP) CAS  *  规格： 3支/套 免疫测定用

山绿茶 CAS  *  规格： 5g

枸橼酸舒芬太 CAS  *  规格： 20mg

比妥 CAS  *  规格： 100mg

白土苓（华南肖菝葜） CAS  *  规格： 10g

卷柏(卷柏) CAS  *  规格： 2g

 CAS  *  规格： 1ml

黑豆 CAS  *  规格： 5g

银杏内酯C(暂行) CAS  *  规格： 20mg

禽腺病毒通用PCR检测试剂盒说明书亚硫酸氢钾  120.17  Sodium bisulfite*：2145137分子量： KHSO3

双(三膦)硼氢亚铜  602.97  双（三膦）硼氢亚铜*：16903-61-0分子量： C36H34BCuP2

丙砜  182.24  Vinyl benzene*：16212-05-8分子量： C9H10O2S

亮蓝  Blue  792.85分子量： C37H34N2Na2O9S3*：3844-45-9

隐色结晶紫  Color crystal violet  373.53分子量： C25H31N3*：603-48-5

活性嫩黄KE-3G  Active yellow ke-3g  分子量： C52H34Cl2N18O20S6.6Na*：59112-78-6

三十  Thirty acid  452.8分子量： C30H60O2*：506-50-3

异丙甲砜  122.19  Methyl group*：4853-74-1分子量： C4H10O2S

1-丁-2,3-二甲三氟磺酸咪唑  302.31  1- two methyl methyl three*：765910-73-4分子量： C10H17F3N2O3S

2-苄吡  169.22  2- benzyl pyridine*：101-82-6分子量： C12H11N

4-溴戊  227.14  4- bromo amylbenzene*：51554-95-1分子量： C11H15Br

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。