详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
尖孢镰刀菌PCR检测试剂盒植物病原规格 | Fusarium oxysporumPCR() | BK-P9191 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
芬布芬 CAS 36330-85-5 * 规格: 100mg
1,3-萘二酚 CAS 132-86-5 * 规格: 50mg
芥酸盐 CAS 7431-77-8 * 规格: 20mg
α-细辛脑 CAS * 规格: 100mg
对羟基苯乙 CAS * 规格: 20mg
来米特 CAS 75706-12-6 * 规格: 100mg
麦迪 CAS 35457-80-8 * 规格: 200mg
芦荟大黄素 CAS 1415-73-2 * 规格: 20mg
奈芬 CAS * 规格: 100mg
大黄酚 CAS 481-74-3 * 规格: 20mg
银杏内酯J; 白果苦内酯J CAS 107438-79-9 * 规格: HPLC≥98%,20mg/支
3-O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[ CAS 68027-14-5 * 规格: HPLC≥98%;5mg/支
胆酸 CAS 81-25-4 * 规格: HPLC≥98%,20mg/支
甘草素;甘草醇 CAS 578-86-9 * 规格: HPLC≥98%,20mg/支
葫芦巴碱 CAS 535-83-1 * 规格: HPLC≥98%,20mg/支
尖孢镰刀菌PCR检测试剂盒植物病原规格2,3-二甲酸 2,3- two piperidine formic acid*:8249-15-3分子量:
2-三氟甲氧氯 196.55 2- three, f*:450-96-4分子量: C7H4ClF3O
1--3-硝 249.01 1- -3-*:645-00-1分子量: C6H4INO2
1-(对)萘 233.31 1- (p-tolyl-amino) naphthalene*:634-43-5分子量: C17H15N
2-甲-5-甲氧并噻唑 179.24 2甲- 5 -甲氧并噻唑*:2941-69-7分子量: C9H9NOS
黄芪甲苷 Astragalus saponins 784.97022分子量:C41H68O14*:83207-58-3,84687-43-4
4-溴-1,2-(亚甲二氧) 201.02 4- -1, 2- (Ya Jiaji two) benzene*:2635-13-4分子量: C7H5BrO2
1,4-二乙 134.22 1,4- two ethyl benzene*:105-05-5分子量: C10H14
4-(Boc-)-1-[(2-羟)(噻吩-2-)甲] 388.529 4- (Boc- -) -1-[(2- hydroxyphenyl) (thiophene -2-) methyl] piperidine*:870703-80-3分子量: C21H28N2O3S
糠醛 Furfural 96.08分子量: C5H4O2*:35796
直接红81 Direct red 81 675.6分子量: C29H19N5Na2O8S2*:259636
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