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原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
马轮状病毒PCR检测试剂盒厂家 | Equine RotavirusRTPCR | BK-P9145 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
甾醇 CAS 57-87-4 * 规格: 20mg
* CAS 58970-76-6 * 规格: 20mg
莱菔子对照药材 CAS * 规格: 1g
款冬 CAS 110042-38-1 * 规格: 20mg
红大戟 CAS * 规格: 3g
延胡索乙素 CAS 6024-85-7 * 规格: 20mg
刺芒柄花素 CAS 485-72-3 * 规格: 20mg
* CAS 78110-38-0 * 规格: 100mg
紫堇灵 CAS * 规格: 20mg
苦玄参苷IA CAS * 规格: 20mg
壬二酸 CAS * 规格: 100mg
右旋糖酐分子量D7 CAS * 规格: 0.2g/支
癸* CAS * 规格: 100mg
贝母碱苷(暂行) CAS * 规格: 20mg
紫萁 CAS * 规格: 20mg
马轮状病毒PCR检测试剂盒厂家氟替卡松 Fluticasone 500.57分子量: C25H31F3O5S*:90566-53-3
(R,R)-2,2'-异亚丙双(4--2-恶唑啉) 334.42 (R, R) -2,2'- isopropylidenebis (4- phenyl -2- oxazolinyl)*:150529-93-4分子量: C21H22N2O2
酞菁蓝B Phthalocyanine blue B 576.08分子量: C32H16CuN8*:147-14-8
碱性品红 Fuchsin 337.85分子量: C20H20ClN3*:632-99-5
丹参酚A Salvia miltiorrhiza phenolic acid A 494.447分子量:C26H22O10*:96574-01-5
羟吴茱萸碱 Hydroxyevodiamine 319.35718分子量:C19H17N3O2*:1238-43-3
3,4,7,8-四甲-1,10-菲罗啉 236.32 3,4,7,8- four methyl -1,10-*:1660-93-1分子量: C16H16N2
钼酸钾 238.13 Potassium molybdate*:13446-49-6分子量: K2MoO4
2,5-二三氟甲 176.14 2,5- two amino three fluorine toluene*:364-13-6分子量: C7H7F3N2
5-溴-2,3-二羟吡 190 5- two hydroxy pyridine -2,3-*:34206-49-0分子量: C5H4BrNO2
6-溴-4,4'-二甲-2,2'-双吡 263.14 6- two -2,2'-*:850413-36-4分子量: C12H11BrN2
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