详细介绍
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
肠出血性大肠杆菌:血清型PCR检测试剂盒规格 | Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)O104:H4PCR | BK-P9123 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
D-松醇;D-Pinitol CAS 10284-63-6 * 规格: 20mg
(S型)人参皂苷Rh2 ;20(S)-G CAS 67400-17-3 * 规格: 20mg
7-羟基千金子二萜醇;7β-Hydrox CAS 34208-98-5 * 规格: 20mg
千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯;5,15-D CAS 218916-52-0 * 规格: 20mg
苹果酸;Malic acid CAS 6915-15-7 * 规格: 20mg
马兜铃酸B;Aristolochic a CAS 475-80-9 * 规格: 20mg
迷迭香酸;Rosmarinic acid CAS 20283-92-5 * 规格: 20mg
丽江碱;Foresaconitine CAS * 规格: 10mg
雷帕;Sirolimus CAS 53123-88-9 * 规格: 20mg
坚牢蓝BB盐;Fast Blue BB CAS 5486-84-0 * 规格: 100mg
金丝桃素;Hypericin CAS 548-04-9 * 规格: 10mg
黄连碱;Coptisine chlori CAS 3486-66-6 * 规格: 20mg
胡萝卜苷;Eleutheroside A CAS 474-58-8 * 规格: 20mg
格列苯脲;Glibenclamide CAS 10238-21-8 * 规格: 20mg
二氢欧山芹醇醋酸酯;ColuMbiane CAS 23180-65-6 * 规格: 20mg
肠出血性大肠杆菌:血清型PCR检测试剂盒规格2-巯-4-(三氟甲)嘧 180.15 2- (three) -4-*:136547-17-6分子量: C5H3F3N2S
4-羟-5-嘧 121 4- hydroxy -5- cyano pyrimidine*:4774-34-9分子量: C5H3N3O
2,5-二氟吡 115.08 2,5- two*:84476-99-3分子量: C5H3F2N
(R)-1-Boc-3- 200.28 (R) -1-Boc-3- aminopiperidine*:188111-79-7分子量: C10H20N2O2
4-氯-2-甲硫-5-甲酸乙酯嘧 232.69 4- -2- -5- ethyl benzoate*:5909-24-0分子量: C8H9ClN2O2S
2-溴-3-甲氧吡 188.02 2- bromide -3- a*:24100-18-3分子量: C6H6BrNO
1,2-二甲咪唑 96.13 1,2- two*:1739-84-0分子量: C5H8N2
铬姆沙伯 Cr Mushabo 分子量:*:sfrcv
庚烷磺钠 Sodium heptanesulfonate 202.24分子量: C7H15O3SNa*:22767-50-6
氢溴高乌甲 Lappaconitine hydrobromide 683.64分子量:C32H44N2O8R*:97792-45-5
2-庚并咪唑 216.32 2- heptyl benzimidazole*:5851-49-0分子量: C14H20N2
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