马传染性贫血病毒PCR检测试剂盒说明书

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

胰凝蛋白酶(含100mL酶解缓冲)10mL

4T1(小鼠腺细胞)褐球固氮菌（需一周准备） Azotobacter chrooccum

LncaP, 人前列腺细胞

伊红美兰琼脂/EMB琼脂/伊红美蓝琼脂/曙红亚甲蓝琼脂/伊红次甲基蓝琼脂/EMB Agar肠道致病菌的分离，亦可用于大肠埃希氏菌的分离和鉴别250克国产/进口

粗柄羊肚菌 Morchella crassipas异常汉逊酵母 Hansenula anomala

人脐静脉平滑肌细胞尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum

植物杆菌 Lactobacillus plantarum光帽鳞伞 Pholiota nameko

人肾上皮细胞*培养基100mL

MDBK(牛肾细胞)5×106cells/瓶×2

Romas(人淋巴瘤细胞)中慢生华癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii

人胃肠道间质瘤细胞英文名称：GIST

马传染性贫血病毒PCR检测试剂盒说明书1,3-双(2,4,6-*)氯咪唑  340.9  1,3- bis (2,4,6- three)*：141556-45-8分子量： C21H25ClN2

聚(L-酸钴-己内酯-乙交酯钴)    Poly (L- lactic acid co caprolactone co glycolide)*：134490-19-0分子量：

正丁亚砜  162.29  Butyl dimethyl*：2168-93-6分子量： C8H18OS

二氧硒  Two selenium oxide  110.96分子量： SeO2*：2025852

二甲黄  Two methyl yellow  225.29分子量： C14H15N3； C6H5N=NC*：22227

荆芥油  Catnip oil  分子量：*：

花椒毒酚  Prickly ash  202.16分子量：C11H6O4*：

邻二甲酸氢钾  204.22  O two formic acid*：877-24-7分子量： C8H5KO4； HOOCC6H4COOK

2--3-甲-5-溴吡  187.04  2- amino -3- -5-*：3430-21-5分子量： C6H7BrN2

邻氯甲  126.58  Ortho chlorine toluene*：95-49-8分子量：95-49-8

亚酰  220.01  Sub - iodine*：536-80-1分子量： C6H5IO