详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
流行性出血热病毒PCR检测试剂盒价格 | Epizootic Hemorrhagic Disease Virus(EHDV)PCR | BK-P9134 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
Hep G2(人肝细胞)5×106cells/瓶×2
人眼脉络色素瘤细胞英文名称:C918
Hanks’平衡/Hanks’ Balanced Salt solution细胞培养级500毫升国产/进口
AtT-20(小鼠垂体瘤细胞)5×106cells/瓶×2
人脑微血管内细胞英文名称:HBMEC
DHL琼脂(胆硫琼脂) 规格: 250g 用途: 用于肠道致病菌特别是沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养。(《中华人民共和国药典》2010年版)
改良月桂基硫酸胰蛋白月示肉汤(MLST) 规格: 250g 用途: 用于奶粉中阪崎肠杆菌的检验的增菌和分子生物学检验方法(PCR)选择性增菌
HMy2.CIR(人B淋巴母细胞)5×106cells/瓶×2
U-87 MG(人神经胶质瘤细胞)5×106cells/瓶×2
小鼠视网膜muller细胞*培养基IM-9(人外周血B淋巴细胞)
人小气道平滑肌细胞*培养基棕褐小单孢菌 Micromonospora brunnea
流行性出血热病毒PCR检测试剂盒价格新亚甲蓝24 New methylene blue 24 347.91分子量: C18H22ClN3S*:1934-16-3
1-(1-甲-4-)嗪 183.29 1- (1- methyl piperidine based -4-) piperazine*:23995-88-2分子量: C10H21N3
己二酸二酰 174.2 Two adipic acid hydrazide*:1071-93-8分子量: C6H14N4O2
环孢菌素C Cyclosporine C. 1218.61064分子量:C62H111N11O1*:59787-61-0
5-硝喹啉 174.16 5- nitro group*:607-34-1分子量: C9H6N2O2
三亚砜 220.07 Three methyl iodide sulfoxide*:1774-47-6分子量: C3H9IOS; (CH3)3S(I)O
2,4,6-三氟 162.11 2,4,6- three fluorine hydrazine*:80025-72-5分子量: C6H5F3N2
1-戊咪唑 138.21 1- methyl imidazole*:分子量: C8H14N2
次甲绿 Methylene green 433分子量: C16H17ClN4O2S · 0.*:224967-52-6
海索 Trihexyphenidyl hydrochloride 224.6分子量:C7H9ClO6*:52-49-3
介子苷 Black - - - - - - - 415.48分子量:C10H18KNO10S2*:64550-88-5
产品咨询
联系我们
上海帛科生物技术有限公司 公司地址:上海嘉定区嘉罗公路1661 号24栋 技术支持:环保在线扫一扫 更多精彩
微信二维码
网站二维码