详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
病毒PCR检测试剂盒规格 | BK(BK Virus、BKV) PCR | BK-P8879 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
噻嗪;纯品型;标准品;有证书 CAS 69327-76-0 * 规格: 0.1g
;纯品型;标准品;有证书 CAS * 规格: 0.25g
木糖醇-对照品;有报告 CAS 87-99-0 * 规格: 1g
柠檬酸;纯品型;标准品;有证书 CAS 77-92-9 * 规格: 0.1g
山梨酸;纯品型;标准品;有证书 CAS 110-44-1 * 规格: 0.25g
半边旗5F CAS * 规格: HPLC≥98%;20mg
4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羟基 CAS 81991-99-3 * 规格: HPLC≥98%;20mg
柯皂苷元 CAS 467-55-0 * 规格: HPLC≥98%;20mg
纤精 CAS 567-75-9 * 规格: HPLC≥98%;20mg
香紫苏二醇 CAS 55881-96-4 * 规格: HPLC≥98%;20mg
泽兰黄 CAS 520-11-6 * 规格: HPLC≥98%;20mg
异古伦宾 CAS 471-54-5 * 规格: HPLC≥98%;20mg
新兰牡荆苷 CAS 23666-13-9 * 规格: HPLC≥98%;10mg
太子参环肽B CAS 145459-19-4 * 规格: HPLC≥98%;20mg
苏丹红Ⅰ CAS 842-07-9 * 规格: HPLC≥98%;20mg
病毒PCR检测试剂盒规格俾斯麦棕Y Bismarck brown Y 419.31分子量: C18H20Cl2N8*:10114-58-6
S-甲-L-半胱氨酸亚砜 151.18 S- methyl -L- cysteine*:6853-87-8分子量: C4H9NO3S
硫耐尔蓝 Nile blue sulfate 732.85分子量: C40H40N6O6S*:3625-57-8
6-溴-2-氯-3-甲喹啉 256.53 6- -2- chloride -3-*:113092-96-9分子量: C10H7BrClN
(ΑR,ΑR)-2,2'-双(Α-N,N-二甲氨甲)-(S,S)-1,1′-双(二环己磷氢)二茂铁 844.95 (alpha R, alpha R (-2,2'-) - alpha -N, N- two methyl ammonia benzene methyl) - (S, S) -1,1 '- bis (dicyclohexyl hydrogen phosphate) Er Maotie*:494227-35-9分子量: C52H74FeN2P2 10*
1,4-二 329.9 1,4- two iodobenzene*:624-38-4分子量: C6H4I2
4--3-氟吡 112.11 4- amino -3-*:2247-88-3分子量: C5H5FN2
N,N'-二-BOC-1H-1-胍吡唑 310.35 N, N'- two -BOC-1H-1- guanidine pyrazole*:152120-54-2分子量: C14H22N4O4
黄杨碱 Huang Yangjian 402.364分子量:C26H46N2O*:
亚硒 Selenite 128.97分子量: H2O3Se*:7783-00-8
4-甲酸 129.16 4- piperidine formic acid*:498-94-2分子量: C6H11NO2
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